COX-2選擇性抑制劑PC407對(duì)TNBS誘導(dǎo)的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用.pdf

1、研究背景：
　　潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerativecolitis,UC）被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一，其病因探尋和治療藥物發(fā)掘一直是研究的熱點(diǎn)。遺傳、環(huán)境、飲食、心理等引發(fā)UC的多種因素可能觸發(fā)一個(gè)連續(xù)的慢性免疫過(guò)程，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T和B淋巴細(xì)胞等參與了此過(guò)程，這些效應(yīng)細(xì)胞表達(dá)的黏附分子、釋放的抗體、細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)，均介導(dǎo)或引起組織破壞和炎性病變。UC的臨床治療以氨基水楊酸類(lèi)藥物應(yīng)用較為廣泛，但此類(lèi)藥物對(duì)環(huán)氧合酶（

2、cyclooxygenase,COX）的非選擇性抑制是其嚴(yán)重不良反應(yīng)的基礎(chǔ)。基于對(duì)UC發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究和現(xiàn)有UC治療藥物的安全性評(píng)估，COX-2選擇性抑制劑開(kāi)始應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)性UC的治療。近年來(lái)關(guān)于已上市的COX-2選擇性抑制劑對(duì)UC治療效果的報(bào)道一致性不高，且對(duì)引起此現(xiàn)象機(jī)制的研究局限在COX下游前列腺素（prostaglandin,PGs）的保護(hù)作用方面，對(duì)COX及其下游產(chǎn)物與UC相關(guān)黏附分子受體的作用研究較少。
　　本課題合

3、成新型COX-2選擇性抑制劑4-[5-萘基-3-（三氟甲基）-1-氫-吡唑-1-基]苯磺酰胺（PC407），并將其應(yīng)用于2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzenesulfonicacid，TNBS）/乙醇誘導(dǎo)的大鼠UC的治療，以期了解其治療作用，探討PC407治療UC的可行性及有效性，并試圖通過(guò)抑制COX-2后UC相關(guān)黏附分子受體半乳糖凝集素-3（gal-3）、細(xì)胞因子腫瘤壞死因子α（TNF-α）的表達(dá)變化解釋

4、PC407治療UC的機(jī)制，為今后選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑應(yīng)用于臨床UC的治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　(1)合成目標(biāo)化合物PC407，并通過(guò)質(zhì)譜和核磁共振氫譜鑒定其結(jié)構(gòu)；(2)應(yīng)用TNBS/乙醇灌腸復(fù)制大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型。實(shí)驗(yàn)設(shè)正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、塞來(lái)昔布陽(yáng)性對(duì)照組（17.6mg·kg-1）和PC407治療組（9.6,19.2,38.4mg·kg-1），灌胃給藥，每日一次，共6天；(3)觀察并記錄各組大鼠體質(zhì)量變

5、化及死亡、稀便情況；實(shí)驗(yàn)第7天，麻醉大鼠，收集腹腔巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)，另分離大鼠結(jié)腸、脾臟、胸腺，觀察結(jié)腸組織病理學(xué)改變，選用稀便率、結(jié)腸指數(shù)、潰瘍比、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)作為衡量治療效果的指標(biāo)；采用免疫組織化學(xué)方法半定量檢測(cè)結(jié)腸黏膜COX-2、gal-3和TNF-α的表達(dá)和分布變化；采用Western-blotting方法半定量檢測(cè)結(jié)腸黏膜COX-2、gal-3的表達(dá)水平變化；采用酶聯(lián)免疫吸附方法（ELISA）體外檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組大鼠腹腔巨噬

6、細(xì)胞分泌細(xì)胞因子TNF-α的水平。
　　結(jié)果：
　　(1)合成足量PC407，波譜鑒定結(jié)果顯示，所合成化合物具體結(jié)構(gòu)與目標(biāo)化合物相符；(2)應(yīng)用TNBS的40％乙醇溶液灌腸成功復(fù)制大鼠UC模型，模型對(duì)照組大鼠可見(jiàn)黏膜缺損，侵及黏膜層與黏膜下層，固有層有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以中性粒細(xì)胞為主，并可見(jiàn)淋巴細(xì)胞等，組織壞死明顯；(3)與模型對(duì)照組相比，PC407（9.6mg·kg-1）可減輕大鼠結(jié)腸組織損傷及病理學(xué)改變，降低結(jié)腸指數(shù)及

7、潰瘍比，抑制UC大鼠結(jié)腸黏膜COX-2活性，降低黏膜TNF-α的表達(dá)水平，提高黏膜gal-3的表達(dá)水平，降低大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α水平；塞來(lái)昔布（17.6mg·kg-1）與PC407（9.6mg·kg-1）治療效果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；PC407（19.2,38.4mg·kg-1）可顯著改善大鼠結(jié)腸組織損傷及炎癥，阻止UC大鼠體質(zhì)量下降，降低稀便發(fā)生率，降低結(jié)腸指數(shù)及潰瘍比，并可對(duì)抗結(jié)腸炎癥引起的胸腺萎縮和脾臟腫大，同時(shí)顯著抑制UC大鼠

8、結(jié)腸黏膜COX-2活性，降低黏膜TNF-α的表達(dá)水平，提高黏膜gal-3的表達(dá)水平，顯著降低大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α水平；PC407（38.4mg·kg-1）與PC407（19.2mg·kg-1）治療效果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　PC407對(duì)TNBS/乙醇誘導(dǎo)的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎具有明顯的治療作用，其中PC407治療組（9.6mg·kg-1）與塞來(lái)昔布陽(yáng)性對(duì)照組（17.6mg·kg-1）治療效果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，PC4

9、07治療組（19.2,38.4mg·kg-1）治療效果優(yōu)于塞來(lái)昔布（17.6mg·kg-1），其機(jī)制可能通過(guò)抑制UC大鼠結(jié)腸黏膜COX-2活性、降低TNF-α的表達(dá)水平、提高gal-3表達(dá)水平，及減少腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α，從而緩解結(jié)腸炎癥；PC407（38.4mg·kg-1）與PC407（19.2mg·kg-1）的治療效果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能是過(guò)分抑制UC大鼠結(jié)腸黏膜COX-2活性，削弱PG的保護(hù)作用，從而未能顯著降低黏膜TNF-α