Typl-HGF基因治療TNBS誘發(fā)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的實驗研究.pdf

1、目的：評價攜帶肝細胞生長因子基因的減毒沙門氏菌(Typl-HGF)對TNBS誘發(fā)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的治療效果。 方法：1.分別用l×109cfu的減毒沙門氏菌(Ty)，攜帶綠色熒光蛋白的減毒沙門氏菌(Typl-GFP)、攜帶肝細胞生長因子基因的減毒沙門氏菌(Typl-HGF)、10％NaHCO3 0.3ml第0、14、28天灌胃免疫小鼠，末次免疫后7d，分別采集各組動物全血并抗凝，用流式檢測抗凝血中CD4+、CD8+、IgM、

2、IgG1、IgA，用EIASA檢測血清IgM、IgG1、IgA免疫球蛋白，MTT法檢測脾臟B、T淋巴細胞的增殖能力。 2.40只wistar大鼠經(jīng)TNBS灌腸誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎模型，并隨機分為4組：Ty治療組、Typl-GFP觀察組、Typl-HGF治療組、模型對照組，每組10只；另設生理鹽水灌腸的正常對照組10只。造模后第3d各組灌胃進行治療，依次給予1×109cfu的Ty、Typl-HGF、Typl-GFP菌液，每只0.5ml

3、，隔日一次，模型和正常對照組給予同體積的100g/L NaHCO3。3次和6次灌胃后1 W，分別觀察各組大鼠的一般情況、結(jié)腸大體觀及評分、結(jié)腸組織學變化及評分和目的基因表達，用流式細胞儀檢測各組外周血CD4+、CD8+、IgM、IgGl、IgA。 結(jié)果：1.小鼠末次免疫后7d，Typl-HGF實驗組CD4+、CD8、、CD4+/CD8+比值降低(p<0.01、p<0.05、p<0.01)。IgM、IgA無統(tǒng)計學意義，IgG1顯著

4、升高p<0.01。 2.3、6次灌胃模型組與正常組相比CD4+T、細胞無明顯變化，但CD8+T細胞下降明顯(P<0.01)；3次治療組CD4+T低于模型組P<0.05，3、6次灌胃模型組CD4+/CD8+T比值較正常組升高(P<0.05)；6次灌胃治療組CD4+、CD8+均明顯低于模型組、對照組(P<0.01，P<0.01，P<0.05，P<0.05)，CD4+/CD8+T比值較模型、對照組下降(P<0.05)。3、6次灌胃模型

5、組與正常組相比IgM、IgG1、IgA明顯增加；3、6次對照組與同期模型相比IgM明顯增加(P<0.01)，而6次治療組與模型組相比IgM、IgG1明顯降低(P<0.05)。 3.Typl-HGF治療組3次灌胃后體重略有增加，較模型對照組平均增加5.3l±1.13g，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，結(jié)腸炎常見癥狀如粘液膿血便、糞便稀等較其它組稍有改善：6次Trypl-HGF治療后動物潰瘍性結(jié)腸炎常見癥狀均明顯好轉(zhuǎn)，精神萎靡減

6、輕，無便中帶血，體重較模型對照組平均增加9.75±2.07g，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，Ty治療組與模型對照組大鼠癥狀均無明顯緩解。3次和6次Typl-HGF治療組結(jié)腸大體標本積分分別為2.20±0.90和1.70±1.10，明顯低于同期Ty治療組(5.10±1.70，4.00±1.50)和模型對照組(5.30±1.30，4.30±1.20)(P<0.01)，且3次和6次Typl-HGF灌胃治療相比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)

7、。光學顯微鏡觀察可見，3次灌胃后Typl-HGF治療組與其它組相比，腸組織炎癥減輕，潰瘍面縮小，并可見粘膜及組織增生現(xiàn)象，組織學評分為3.87±0.76，但與Ty治療組和模型對照組無明顯差別(P>0.05)；6次Typl-HGF治療后腸組織病理檢查較3次治療更好，潰瘍邊可見新生肉芽組織增生，有的甚至潰瘍及黏膜已修復，組織學評分為1.60±0.30，而同期模型組標本積分為3.50±0.70，二者之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，3次和

8、6次Ty治療組與模型對照組相比無明顯改變。Typl-GFP灌胃后在結(jié)腸組織可見GFP強表達。 結(jié)論：1.口服Typl-HGF能降低了小鼠的細胞免疫和體液免疫，對正常小鼠免疫有抑制作用。2.Typl-HGF能明顯減輕TNBS誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的癥狀及炎癥，對已形成的粘膜損傷及潰瘍有促修復作用。同時大鼠實驗性結(jié)腸炎發(fā)病過程中，機體免疫功能處于亢進狀態(tài)，Typl-HGF能夠抑制T增殖和B淋巴細胞抗體的產(chǎn)生，它可能代表了一種新的治