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文檔簡介
1、第一軍醫(yī)大學博士學位論文印跡基因在人類種植前胚胎及卵巢上皮癌中的研究姓名:沈文潔申請學位級別:博士專業(yè):婦產科學指導教師:邢福祺20060512中文摘要syndrome,AS)患兒3例,二者均為遺傳性印跡疾病,在普通患者中僅有50%~60%的BWS和5%~10%的AS患者存在甲基化異常,而沒有基因突變,在ART出生患兒中100%的AS和70%的BWS患者存在母源性等位基因甲基化異常,導致印跡丟失。動物實驗表明配子和早期胚胎形成期是甲基化
2、印跡擦除、建立和維持的關鍵窗口期,而此期恰為ART體外干預階段。因此可以推測ICSI或ART過程中的某些環(huán)節(jié)可能干擾了卵母細胞或早期胚胎基因組的印跡形成和維持,從而引發(fā)有關ART技術與先天性印跡疾病之間是否存在因果關系的討論。由于印跡基因為單等位基因表達,更易受外界理化因素的影響出現(xiàn)印跡異常。研究表明動物胚胎體外培養(yǎng)時,培養(yǎng)條件可以干擾數(shù)條印跡基因的印跡形成和維持;尤其是牛、羊等家禽的胚胎受精后暴露于體外環(huán)境下,會產生“大嬰綜合癥”,臨
3、床特征類似于人類的BWS??紤]到人類胚胎干細胞培養(yǎng)的目的是用于組織移植治療,因而在移植前,有必要了解體外培養(yǎng)環(huán)境是否干擾了印跡基因在胚胎干細胞中的印跡狀態(tài)。為解決ART和胚胎干細胞培養(yǎng)過程中的這些臨床問題,迫切需要明確遺傳性印跡疾病相關印跡基因是否開始表達于人類卵子和種植前胚胎,完善印跡基因在人類種植前胚胎中的表達圖譜。由于人類成熟卵子和種植前胚胎來源的局限性,而且標本僅含單個細胞至數(shù)個細胞,mRNA含量極微,技術難度大,目前相關研究多
4、局限于動物實驗。對鼠胚的研究提示各印跡基因在早期胚胎階段開始表達的時間不同。人類僅檢測了SNPRN、H19、IGF一2等數(shù)條印跡基因在種植前胚胎中的表達。關于BWS相關印跡基因P57“92、LITl、TSSC3,S—R綜合癥(Silver—RussellSyndrome,SRS)候選印跡基因GRBIO以及抑癌印跡基因ARHI、LOTl、PEG3是否在人類種植前胚胎中表達,國內外尚無報道,我們應用巢式RT—PCR技術首次檢測了這7條印跡基
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