Miox基因在胚胎前腎發(fā)育過程中的時空表達(dá)及其功能的初步研究.pdf

1、目的:研究Miox基因在胚胎前腎發(fā)育過程中的表達(dá)模式及其對胚胎前腎發(fā)育的調(diào)控作用的初步研究。
　　方法:生物信息學(xué)分析Miox蛋白在不同物種之間的同源性及保守性;通過半定量(RT-PCR)PCR及實時熒光定量(Real-Time PCR)PCR以及整胚原位雜交(whole-mount in situ hybridization，WISH)技術(shù)檢測Miox基因在爪蟾和斑馬魚胚胎前腎發(fā)育過程中的時空表達(dá)模式;通過顯微注射技術(shù)將Miox

2、 mRNA注射到斑馬魚胚胎單細(xì)胞期，觀察Miox因過表達(dá)后對斑馬魚胚胎前腎發(fā)育的調(diào)控。
　　結(jié)果:從生物信息學(xué)分析可知，Miox基因在物種進(jìn)化上是高度保守的;Miox蛋白在不同物種間的同源性高達(dá)65％-70％。我們在爪蟾及斑馬魚胚胎上都做了Miox基因的表達(dá)譜分析。Miox基因在爪蟾胚胎第28期開始有微量表達(dá)，隨著胚胎的發(fā)育表達(dá)量逐漸增高，在胚胎第40期表達(dá)含量達(dá)到最高并且以穩(wěn)定的水平在后面時期表達(dá)。整胚原位雜交呈現(xiàn)出相似的表達(dá)趨

3、勢。我們還發(fā)現(xiàn)，在爪蟾整個胚胎發(fā)育過程中，miox都只在前腎表達(dá)。換句話說，miox是一個腎臟特異性表達(dá)基因。斑馬魚real-time PCR顯示Miox基因在胚胎發(fā)育Sphere時期有少量表達(dá)，隨后表達(dá)下降，在Shield，Bud，5-6somites，24hpf幾個時期幾乎沒有表達(dá)，在胚胎發(fā)育到36hpf表達(dá)又逐漸增多，直到48hpf時期表達(dá)達(dá)到頂峰，隨后表達(dá)逐漸下降，在60hpf,72hpf甚至到成年期表達(dá)基本穩(wěn)定維持在某一水平。

4、此外，我們同時檢測了Miox基因在斑馬魚72hpf的表達(dá)情況，其也只在前腎的位置表達(dá)。而且miox過表達(dá)以后發(fā)現(xiàn)有3個前腎的特異性標(biāo)記基因(slc20a1a，foxj1a，pdzk1)的表達(dá)上調(diào)，上調(diào)比例分別為80％，69％和91％。有一個基因(gata3)表達(dá)下調(diào)，下調(diào)比例是90％。
　　結(jié)論:Miox基因在物種之間是高度保守的，并且在胚胎發(fā)育過程中只在前腎表達(dá)，是一個腎臟特異性基因。Miox基因在前腎發(fā)育過程中起著重要的調(diào)控作