Miox基因在胚胎前腎發(fā)育過(guò)程中的時(shí)空表達(dá)及其功能的初步研究.pdf

1、目的:研究Miox基因在胚胎前腎發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)模式及其對(duì)胚胎前腎發(fā)育的調(diào)控作用的初步研究。
　　方法:生物信息學(xué)分析Miox蛋白在不同物種之間的同源性及保守性;通過(guò)半定量(RT-PCR)PCR及實(shí)時(shí)熒光定量(Real-Time PCR)PCR以及整胚原位雜交(whole-mount in situ hybridization，WISH)技術(shù)檢測(cè)Miox基因在爪蟾和斑馬魚(yú)胚胎前腎發(fā)育過(guò)程中的時(shí)空表達(dá)模式;通過(guò)顯微注射技術(shù)將Miox

2、 mRNA注射到斑馬魚(yú)胚胎單細(xì)胞期，觀察Miox因過(guò)表達(dá)后對(duì)斑馬魚(yú)胚胎前腎發(fā)育的調(diào)控。
　　結(jié)果:從生物信息學(xué)分析可知，Miox基因在物種進(jìn)化上是高度保守的;Miox蛋白在不同物種間的同源性高達(dá)65％-70％。我們?cè)谧讣鞍唏R魚(yú)胚胎上都做了Miox基因的表達(dá)譜分析。Miox基因在爪蟾胚胎第28期開(kāi)始有微量表達(dá)，隨著胚胎的發(fā)育表達(dá)量逐漸增高，在胚胎第40期表達(dá)含量達(dá)到最高并且以穩(wěn)定的水平在后面時(shí)期表達(dá)。整胚原位雜交呈現(xiàn)出相似的表達(dá)趨

3、勢(shì)。我們還發(fā)現(xiàn)，在爪蟾整個(gè)胚胎發(fā)育過(guò)程中，miox都只在前腎表達(dá)。換句話(huà)說(shuō)，miox是一個(gè)腎臟特異性表達(dá)基因。斑馬魚(yú)real-time PCR顯示Miox基因在胚胎發(fā)育Sphere時(shí)期有少量表達(dá)，隨后表達(dá)下降，在Shield，Bud，5-6somites，24hpf幾個(gè)時(shí)期幾乎沒(méi)有表達(dá)，在胚胎發(fā)育到36hpf表達(dá)又逐漸增多，直到48hpf時(shí)期表達(dá)達(dá)到頂峰，隨后表達(dá)逐漸下降，在60hpf,72hpf甚至到成年期表達(dá)基本穩(wěn)定維持在某一水平。

4、此外，我們同時(shí)檢測(cè)了Miox基因在斑馬魚(yú)72hpf的表達(dá)情況，其也只在前腎的位置表達(dá)。而且miox過(guò)表達(dá)以后發(fā)現(xiàn)有3個(gè)前腎的特異性標(biāo)記基因(slc20a1a，foxj1a，pdzk1)的表達(dá)上調(diào)，上調(diào)比例分別為80％，69％和91％。有一個(gè)基因(gata3)表達(dá)下調(diào)，下調(diào)比例是90％。
　　結(jié)論:Miox基因在物種之間是高度保守的，并且在胚胎發(fā)育過(guò)程中只在前腎表達(dá)，是一個(gè)腎臟特異性基因。Miox基因在前腎發(fā)育過(guò)程中起著重要的調(diào)控作