視黃酸依賴反義 cyclin D1 RNA 表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)白血病細(xì)胞的效應(yīng)研究.pdf

1、該研究應(yīng)用DNA重組技術(shù)構(gòu)建了含有 cylin D1 5<'>端序列反義片段的反義 cylin D1 RNA 表達(dá)載體(pCI-neo/RARE3-TK/AScylin D1),并采用免疫組化方法觀測(cè)到轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的反義 cylin D1 表達(dá)可受RA調(diào)控;同時(shí)運(yùn)用MTT實(shí)驗(yàn)、NBT實(shí)驗(yàn)、透射電鏡觀測(cè)、免疫熒光檢測(cè)、RT-PCR以及蛋白免疫印跡等技術(shù)手段,初步探討了 RA 及其誘導(dǎo)的反義 cylin D1 RNA 表達(dá)對(duì)HL-60 細(xì)胞的

2、效應(yīng)及其可能的分子機(jī)制.該研究主要結(jié)果如下:1.采用DNA重組技術(shù)成功構(gòu)建了含有cylin D1 5<'>端序列反義片段的真核表達(dá)載體(pCI-neo/RARE3-TK/AScylin D1,轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞,經(jīng)G418篩選陽性細(xì)胞克隆,利用 RA 處理后,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的 cylin D1 表達(dá)量明顯低于未轉(zhuǎn)染組.表明RA可誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)的反義 cylin D1 的表達(dá).2.RA處理(pCI-neo/RARE3-TK/AScylin D

3、1)轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的HL-60細(xì)胞后,可以抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞分化的發(fā)生,其中以轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)RA處理后變化更為顯著.說明RA可經(jīng)RA依賴的反義 cylcin D1的表達(dá)誘發(fā)相關(guān)效應(yīng)的發(fā)生,且兩者具有協(xié)同作用. 3.pCI-neo/RARE3-TK/AScylin D1轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的HL-60細(xì)胞經(jīng)RA處理后,細(xì)胞中的CDK4與Rb mRNA以及CDK4蛋白表達(dá)水平降低,同時(shí)p16的蛋白表達(dá)增強(qiáng),且均以pCI-neo/RARE3-TK/AS