通過敲除TAP1及TAPBP基因產(chǎn)生低免疫原性的人類胚胎干細胞.pdf

1、人類胚胎干細胞在1998年首次從早期胚胎的內細胞團分離出來，可以在體外進行無限的自我更新并保持分化成三胚層所有細胞形式的多能性，由于這種特性胚胎干細胞被認為是一種對于細胞治療很有前景的資源。然而它的應用缺面臨著一系列移植免疫排斥的問題。而表達在細胞表面的一類主要組織相容性復合體(MHCⅠ)是引起抑制免疫排斥的主要原因?？乖庸は嚓P轉運子1(Transporter associated with antigenpresentation1,

2、TAP1)和TAP相關糖蛋白（TAP-associated glycoprotein，TAPBP）在調控MHCⅠ的表達過程中起重要作用。本文通過轉錄激活子樣效應因子核酸酶(TALEN)技術分別產(chǎn)生TAP1和TAPBP缺失的人類胚胎干細胞。這些細胞具有正常的多能性，核型及分化能力，但是和野生型比較，MHCⅠ在這些細胞表面的表達及免疫原性都明顯降低。本研究為將來的移植治療提供了一種通用的具有多能性的低免疫原性供體細胞奠定基礎。
　　實

3、驗結果：
　　1.產(chǎn)生TAP1基因敲除的人類胚胎干細胞系，并驗證其免疫原性降低，同時具有同野生型一樣的多能性及分化能力。將特異性識別TAP1的轉錄激活子樣效應因子核酸酶轉入人類胚胎干細胞中，藥殺篩選后，得到3個單敲細胞系，5個雙敲細胞系，在細胞水平的打靶效率為27.1％，以雙等位基因敲除的細胞系TAP1-16，單等位基因敲除細胞系TAP1-13，通過免疫染色、RT-PCR、畸胎瘤等方法驗證其多能性完整，并利用檢測MHCⅠ在其細胞表

4、面的表達比野生型有大幅度降低，IFN-γ誘導后上調幅度很小，通過小鼠體內的炎癥反應發(fā)現(xiàn)TAP1-13及TAP1-16細胞系引起的T淋巴細胞和自然殺傷性淋巴細胞總數(shù)相較于野生型有顯著性降低。
　　2.產(chǎn)生TAPBP基因敲除的人類胚胎干細胞系，并驗證其免疫原性降低，同時具有同野生型一樣的多能性及分化能力。將特異性識別TAPBP的轉錄激活子樣效應因子核酸酶轉入人類胚胎干細胞中，藥殺篩選后，得到12個單敲細胞系，5個雙敲細胞系，在細胞水平