胚胎干細胞源性神經(jīng)前體細胞的免疫原性及同源性樹突狀細胞對其在腦移植耐受中的作用.pdf

1、華中科技大學博士學位論文胚胎干細胞源性神經(jīng)前體細胞的免疫原性及同源性樹突狀細胞對其在腦移植耐受中的作用姓名：梅愛農(nóng)申請學位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：張?zhí)K明20060301華中科技大學同濟醫(yī)學院博士學位論文目的運用“五步”法誘導ES—D3系鼠胚胎干細胞(mESCs)向NPCs分化。方法分化前ESCs在明膠瓶中傳代培養(yǎng)去處滋養(yǎng)層，在培養(yǎng)基中加入1000”／ml重組白血病抑制因子(rLIF)阻止ESCs分化。單細胞懸液在去除rLIF的

2、培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)4d以形成擬配體(EB)，轉(zhuǎn)入無血清ITSF培養(yǎng)基培養(yǎng)6d富集nstin陽性細胞，在有絲分裂原堿性成纖維生長因子(bFGF)作用下擴增6d，撤銷bFGF后在煙酰胺作用下誘導出神經(jīng)樣細胞。共計經(jīng)過5個步驟。結(jié)果經(jīng)由無血清培養(yǎng)基可獲得約80％以上的Nestin染色陽性NPCs，該細胞bFGF存在的情況下可反復傳代與擴增。當去處bFGF后在煙酰胺的作用下，這些細胞可分化出GFAP或Tuj—l陽性的神經(jīng)樣細胞。結(jié)論本實驗從ESC

3、s中誘導出nestin染色陽性的NPC，為進一步的神經(jīng)生物學研究和細胞移植治療提供了充足的細胞來源。第二部分神經(jīng)前體細胞的免疫原性及向腦缺血大鼠腦內(nèi)移植免疫學現(xiàn)象觀察目的觀察體外mESCs和NPCs的免疫原性及NPCs腦內(nèi)移植之后的免疫學現(xiàn)象。方法1運用流式細胞儀檢測ESD3mESCs細胞及其衍生NPCs細胞表面MHC—I、MItCAI的組成型表達，并在20ng／mlY干擾素(IFNY)誘導作用下觀察NPCs細胞表面MHC—I、MHCI