胚胎干細(xì)胞來源的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞眼內(nèi)移植及致瘤性的研究.pdf

1、視網(wǎng)膜變性是一類伴隨著視網(wǎng)膜細(xì)胞的壞死或凋亡的病變的總稱。但目前，這類疾病尚沒有有效的治療手段。所以，任何能夠防止這些病變的發(fā)生或能幫助視網(wǎng)膜重建的方法都可能成為臨床上有效的治療措施。
　　雖然已有的報(bào)道證實(shí)了來自胎兒的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞(retinal progenitor cells，RPCs)移植治療視網(wǎng)膜變性類疾病的安全性和有效性，但是其來源始終限制了其應(yīng)用。胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells，ESCs)是胚

2、胎著床前囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)在體外特定培養(yǎng)條件下建立的細(xì)胞系，具有自我更新的能力和發(fā)育全能性的特點(diǎn)。ESCs能夠分化成為各種類型的細(xì)胞，這使得它們具有巨大的研究價(jià)值，為臨床提供了充足的細(xì)胞來源。但同時(shí)，ESCs持續(xù)的自我更新能力和發(fā)育全能性，也使得細(xì)胞分化的高效性和細(xì)胞移植的安全性特別引起人們的關(guān)注。我的課題也是基于此，探討了胚胎干細(xì)胞移植治療中的相關(guān)問題。
　　首先，通過流式細(xì)胞分選，我們富集到Soxl陽性的神經(jīng)上皮細(xì)胞，提高了進(jìn)一

3、步向視網(wǎng)膜方向分化的效率。同時(shí)，去除了分化細(xì)胞中未分化的ESCs的污染，避免了畸胎瘤的產(chǎn)生。但是，在61％的細(xì)胞移植組中，我們發(fā)現(xiàn)了過度增殖的神經(jīng)組織（neural overgrowth，NOG）。于是，我們通過全轉(zhuǎn)錄本芯片的檢測，發(fā)現(xiàn)canonical Wnt通路在ESC-RPCs中的異常激活。同時(shí)，我們的實(shí)驗(yàn)證明通過抑制canonical Wnt通路，能夠顯著的促進(jìn)ESC-RPCs進(jìn)一步成熟，并使NOG的比率降低至3％。組織免疫組化

4、和視網(wǎng)膜電生理檢測結(jié)果表明，抑制canonical Wnt通路后ESC-RPCs能夠有效的整合到宿主視網(wǎng)膜中，形成突觸連接，并且?guī)椭拗骰謴?fù)視功能。
　　我們針對canonical Wnt通路對ESC-RPCs的分化和致瘤性的調(diào)控作用及其機(jī)制進(jìn)行了深入的研究。結(jié)果表明，canonical Wnt通路可能通過調(diào)控Tcf1，影響Sox2和Nestin的表達(dá)水平并最終參與分化和腫瘤形成的調(diào)控。當(dāng)我們在ESC-RPCs中，沉默Sox2和N