胚胎鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞體外培養(yǎng)和移植的研究.pdf

1、視網(wǎng)膜作為神經(jīng)組織的延伸，損傷后不能再自我修復(fù)，僅代以神經(jīng)膠質(zhì)，功能完全喪失，因此視網(wǎng)膜疾病的治療尤為棘手。隨著干細(xì)胞的研究不斷深入，期望能夠?qū)⒁暰W(wǎng)膜干細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增并且移植回體內(nèi)，以修復(fù)受損的視網(wǎng)膜組織。 目的：探討體外分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增SD大鼠胚胎鼠的視網(wǎng)膜干細(xì)胞的方法。探討成年SD大鼠視網(wǎng)膜損傷模型建立的方法。研究用5-溴脫氧尿嘧啶（5-Brdu）標(biāo)記視網(wǎng)膜干細(xì)胞的方法。探討SD大鼠胚胎鼠的視網(wǎng)膜干細(xì)胞的移植，對(duì)術(shù)后

2、移植區(qū)的形態(tài)學(xué)觀察。 材料和方法：取20只SD大鼠胚胎鼠的視網(wǎng)膜組織，采用酶消化的方法獲得單個(gè)細(xì)胞，在干細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，觀察原代和傳代細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，并用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法來(lái)檢測(cè)巢蛋白（NESTIN）的表達(dá)。應(yīng)用視神經(jīng)鉗夾的方式對(duì)成年SD大鼠的制作視網(wǎng)膜損傷模型。5-Brdu標(biāo)記一代細(xì)胞，通過(guò)玻璃體腔注射入損傷模型眼，2周后摘除眼球進(jìn)行光鏡觀察。 結(jié)果：SD大鼠胚胎鼠的視網(wǎng)膜干細(xì)胞在體外懸浮生長(zhǎng)成致密的球形細(xì)胞團(tuán)

3、，傳代后也能夠生成新的細(xì)胞團(tuán)，原代和傳代細(xì)胞NESTIN蛋白均表達(dá)陽(yáng)性。視神經(jīng)鉗夾方法制作的視網(wǎng)膜損傷模型，經(jīng)電生理（ERG）檢測(cè)以后ab波波峰均有下降，且光鏡下觀察視網(wǎng)膜各層細(xì)胞數(shù)量減少，結(jié)構(gòu)破壞，證明模型制作成功。將標(biāo)記有5-Brdu的一代細(xì)胞移植模型眼后，光鏡下可見(jiàn)移植細(xì)胞整合入視網(wǎng)膜組織。 結(jié)論：SD大鼠胚胎鼠的視網(wǎng)膜干細(xì)胞可以進(jìn)行體外培養(yǎng)和擴(kuò)增，通過(guò)玻璃體腔注射的方法移植入視網(wǎng)膜損傷的眼中。移植2周后的細(xì)胞存活并且整合