肉雞2個(gè)肌肉發(fā)育相關(guān)基因的多態(tài)性與功能研究.pdf

1、肌肉是動(dòng)物生存和運(yùn)動(dòng)的重要組織，是人類重要的動(dòng)物蛋白來源。在機(jī)體三種肌肉組織中，骨骼肌是在脊椎動(dòng)物胚胎期由軸旁中胚層發(fā)育而來的一個(gè)復(fù)雜的組織，與骨骼鏈接、骨骼的活動(dòng)和姿勢的保持等組織器官的多種功能相關(guān)。骨骼肌的形成是一個(gè)復(fù)雜的過程，在多基因的共同作用下，通過成肌細(xì)胞（肌肉前體細(xì)胞）的增殖和分化形成肌纖維?；诒緦?shí)驗(yàn)室前期的GWAS結(jié)果，本論文研究了與肉雞肌肉發(fā)育相關(guān)的GJA1（縫隙連接蛋白1）和HDAC2（組蛋白脫乙酰酶2）基因的功能和

2、多態(tài)性。
　　試驗(yàn)-1:本研究旨在研究功能基因HDAC2、GJA1與雞肌肉生長發(fā)育的關(guān)系。利用qRT-PCR技術(shù)，檢測了HDAC2基因mRNA在成肌細(xì)胞增殖分化期、胚胎期（4個(gè)時(shí)間點(diǎn)）和生長發(fā)育不同階段（5個(gè)時(shí)間點(diǎn)）的表達(dá)特性。HDAC2基因在4個(gè)胚齡（ED14，16，18和21）的胸肌和腿肌組織中表達(dá)呈顯著上升趨勢，該基因可能在胸肌和腿肌的成肌細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮作用。體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，雞胚成肌細(xì)胞增殖的24h至48h期間，H

3、DAC2表達(dá)量顯著下降，肌肉發(fā)育特異性調(diào)控因子PAX7的表達(dá)量顯著升高。在0-72h內(nèi)，細(xì)胞數(shù)呈持續(xù)上升趨勢。隨著成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化時(shí)間的延長，HDAC2和成肌分化標(biāo)志性基因MYO D1的表達(dá)量均顯著上升。通過siRNA對GJA1基因進(jìn)行功能分析。三種類型的siRNA（siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3）轉(zhuǎn)染成肌細(xì)胞24h后，GJA1表達(dá)量顯著下降，且siRNA-1對GJA1基因的抑制作用更為顯著;與對照組相比，siRNA-1

4、在轉(zhuǎn)染后24h、48h和72h，均顯著抑制成肌細(xì)胞的增殖和分化。綜上所述，HDAC2在成肌細(xì)胞發(fā)育過程中可能發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞分化的功能。推測GJA1可以促進(jìn)成肌細(xì)胞增殖和分化。
　　試驗(yàn)-2:本研究以269只北京油雞(BJY)和176只科寶雞(CB)為素材，通過DNA測序和HRM(高分辨率熔解)的方法，對中外雞群GJA1和HDAC2基因進(jìn)行了單核苷酸多態(tài)性(SNPs)篩選鑒定。在GJA1基因檢測到4個(gè)SNP，一個(gè)SNP位

5、于外顯子區(qū)域(C61223231T或C-1110C＞T)為同義突變;兩個(gè)SNP位于內(nèi)含子區(qū)域(A61229799C或c.5460A＞C，T61229928A或c.5589T＞A);一個(gè)SNP位于啟動(dòng)子（A61230599C或c.6260A＞C）的區(qū)域。在HDAC2基因發(fā)現(xiàn)兩個(gè)SNP均位于啟動(dòng)子區(qū)域（T64230025C、A64229858C。GJA1基因的4個(gè)SNP均與雞生長性狀顯著相關(guān)，但是HDAC2基因的兩個(gè)SNP與生長性狀相關(guān)不顯