定點封閉腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵位點防治HBV相關(guān)肝細胞癌的研究.pdf

1、目的:針對HBV相關(guān)HCC發(fā)生、發(fā)展中的關(guān)鍵因素,在肯定互補于c-Myc結(jié)合位點的人工合成的反義寡核苷酸(asON)抑制HepG2.2.15療效的前提下,以最新型的腺病毒載體AdEasy-1 system為基因轉(zhuǎn)移工具,構(gòu)建了針對于hTERT啟動子區(qū)HBV preS2同源序列、c-Myc結(jié)合位點及hTERT全長啟動子的反義RNA腺病毒表達載體,經(jīng)過293細胞的包裝,成功獲得了具有感染能力的重組腺病毒顆粒,體內(nèi)外研究反義封閉hTERT啟動

2、子活性區(qū)、HBV preS2同源序列、c-Myc結(jié)合位點等參與腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵部位,及癌基因c-Myc、致瘤病毒HBVpreS2基因表達,對HBV相關(guān)肝癌細胞的生長抑制效應(yīng),為臨床反義基因治療HBV相關(guān)HCC奠定基礎(chǔ).結(jié)論:選擇在腫瘤發(fā)生中起關(guān)鍵作用的細胞端粒酶的催化亞單位(hTERT)啟動子活性區(qū)、HBV preS2同源序列、c-Myc結(jié)合位點等關(guān)鍵部位為靶基因,利用反義技術(shù)定點封閉,不僅封閉了腫瘤發(fā)生過程中癌基因c-Myc的作用位點、

3、致瘤病毒HBV的整合部位,而且同時封閉了細胞端粒酶hTERT啟動子的活性,由于HBV preS2整合位點與HBV preS2基因的同源性,因此也封閉了HBV preS2的活性,以此研究基因治療HBV相關(guān)肝細胞癌的生物學(xué)效應(yīng),在國內(nèi)外尚屬首次報道.體外研究證實，針對于端粒酶啟動子活性區(qū)、HBV preS2同源序列、c-Myc結(jié)合位點關(guān)鍵區(qū)段的反義重組腺病毒，可以高效率感染肝癌細胞，通過對相關(guān)位點的有效封閉，不僅能夠?qū)Ц伟┘毎蛲?、抑制細?/p>

4、生長、降低端粒酶活性，從而抑制肝癌細胞的惡性行為，而且能夠有效抑制HBV抗原表達.但多種反義RNA載體的聯(lián)合應(yīng)用難以達到預(yù)期的療效，可能不是一種有效的基因治療方案.利用最新型的腺病毒載體系統(tǒng)——AdEasy-1 system作為基因轉(zhuǎn)移的載體，既能在真核細胞內(nèi)高效表達目的基因，達到基因治療的目的，又能夠克服常規(guī)腺病毒載體同源重組困難、不易篩選的缺點，使基因治療操作簡單、易行.由于人類端粒酶結(jié)構(gòu)具有一致性，該研究獲得的針對于腫瘤發(fā)生中起關(guān)

5、鍵作用的細胞端粒酶催化亞單位（hTERT）的啟動子活性區(qū)、HBV preS2整合位點、c-Myc結(jié)合位點等關(guān)鍵靶基因的重組腺病毒，不僅適用于肝癌，而且適用于其他端粒酶陽性的惡性腫瘤的基因治療研究.由于缺陷型腺病毒是目前唯一被批準應(yīng)用于臨床治療的病毒型載體，能夠高效感染靶細胞，且高效表達目的基因，而病毒本身不整合，表現(xiàn)出較高的生物安全性，該研究所構(gòu)建的攜帶有端粒酶啟動子調(diào)控區(qū)HBV preS2整合位點、c-Myc結(jié)合位點及全啟動子活性區(qū)等