益氣活血方通過“oxLDL-SRS-巨噬細胞”途徑影響動脈粥樣硬化斑塊易損性的機制.pdf

1、研究背景：
　　益氣活血方寧心痛顆粒是臨床治療冠心病不穩(wěn)定性心絞痛的有效中藥制劑，可抑制易損斑塊內炎癥因子的表達，減輕炎癥反應，穩(wěn)定斑塊。巨噬細胞通過SRs攝取oxLDL，是形成泡沫細胞的關鍵，泡沫細胞聚集形成大塊的脂肪最終導致粥樣斑塊易損性增加。巨噬細胞是動脈粥樣硬化及易損斑塊形成的重要靶細胞，寧心痛顆粒在細胞水平穩(wěn)定斑塊的作用機制尚有待深入研究。
　　目的：
　　觀察寧心痛顆粒對THP-1源性巨噬細胞攝取oxLDL

2、形成泡沫細胞過程中關鍵的SRs(SRA/CD36/ABCA1)表達情況的影響，進一步探討其干預動脈粥樣硬化斑塊易損性的機制。
　　方法：
　　THP-1細胞經160nM的PMA誘導分化成巨噬細胞，按以下分組:①空白組，即巨噬細胞組;②對照組，即泡沫細胞組，由巨噬細胞加oxLDL而形成;③寧心痛顆粒有效組分及含藥血清干預組:分別給予APS、LIG、APS+LIG、寧心痛顆粒含藥血清加oxLDL（含藥血清組另設空白血清作對照）;

3、④陽性對照組:α-toc加oxLDL;⑤陰性對照組:DXM加oxLDL。用油紅O染色觀察巨噬細胞泡沫化細胞內脂質的變化，酶法及高效液相色譜法檢測泡沫細胞生成率，WB法檢測SRs（SRA/CD36/ABCA1）及其通路中關鍵蛋白LXRα/PPARγ的表達情況。
　　用PPARγshRNA Plasmid抑制THP-1源性巨噬細胞PPARγ的表達，分別給予APS、LIG、APS+LIG、寧心痛顆粒含藥血清加oxLDL，再用上述實驗方法

4、檢測巨噬細胞泡沫化的改變。
　　結果：
　　1、寧心痛顆粒益氣作用的組分黃芪多糖較對照組能明顯下調巨噬細胞CD36，上調ABCA1、PPARγ(P＜0.05)，抑制巨噬細胞對oxLDL的凈攝入，減少泡沫化。
　　2、寧心痛顆?；钛饔玫慕M分藁本內酯較對照組能明顯下調巨噬細胞CD36，上調ABCA1、PPARγ(P＜0.05)，抑制巨噬細胞對oxLDL的凈攝入，減少泡沫化。
　　3、黃芪多糖合藁本內酯較對照組能明顯

5、下調巨噬細胞SRA、 CD36，上調ABCA1、PPARγ(P＜0.05)，抑制巨噬細胞對oxLDL的凈攝入，減少泡沫化。
　　4、寧心痛顆粒含藥血清較對照組能明顯下調巨噬細胞SRA、 CD36，上調ABCA1、PPARγ(P＜0.05)，抑制巨噬細胞對oxLDL的凈攝入，減少泡沫化。
　　5、黃芪多糖、藁本內酯、黃芪多糖合藁本內酯、寧心痛顆粒含藥血清對巨噬細胞SRA、 CD36表達的抑制強度由高至低為:寧心痛顆粒含藥血清、

6、黃芪多糖合藁本內酯、黃芪多糖、藁本內酯，與對ABCA1、PPARγ的上調強度由高至低排序一致。
　　6、siRNA抑制THP-1源性巨噬細胞PPARγ的表達后，各組藥物抑制巨噬細胞泡沫化的能力均明顯下降，但寧心痛顆粒含藥血清仍有一定的抑制作用。
　　結論：
　　1、益氣活血方寧心痛顆粒益氣、活血的有效組分黃芪多糖、藁本內酯以及含藥血清均能通過調節(jié)脂質體的表達，抑制巨噬細胞對oxLDL的凈攝入，減少泡沫化。
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