中國(guó)HIV感染者48周HAART治療對(duì)細(xì)胞內(nèi)HIV-1DNA的影響和γ細(xì)胞因子的變化.pdf

1、高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療(highly active antiretroviral therapy，HARRT)引入艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)的臨床治療后，HIV/AIDS由不治之癥成為了可以控制的疾病。但是，單純的HARRT治療不能根治艾滋病病毒(human immunodeficiencyvirus，HIV)感染。一方面，病毒變異而出現(xiàn)耐藥基因;另一方面，HIV病毒儲(chǔ)存庫(kù)持續(xù)

2、存在:靜止CD4+T細(xì)胞整合有HIV-1 DNA并能轉(zhuǎn)變?yōu)殪o息狀態(tài)而長(zhǎng)期存在;HIV病毒感染的單核細(xì)胞有抗凋亡的作用;同時(shí)還有其他細(xì)胞和組織可能成為HIV-1 DNA的“避難所”。這些機(jī)制使得HIV病毒能逃脫HAART的作用并持續(xù)地存在于感染者體內(nèi)，一旦中斷HAART即可能出現(xiàn)病毒反彈。另外，γ鏈細(xì)胞因子在抗病毒免疫應(yīng)答和疾病過(guò)程中扮演了重要的角色，在HIV病毒庫(kù)的建立和清除中也可能起一定作用。關(guān)于HIV細(xì)胞內(nèi)病毒庫(kù)的研究國(guó)外已有文獻(xiàn)報(bào)

3、道，但在中國(guó)HIV感染者中同類(lèi)研究仍很少見(jiàn)。觀察中國(guó)HIV感染者接受抗反轉(zhuǎn)錄病毒療法對(duì)細(xì)胞內(nèi)HIV-1 DNA的影響及其與主要的γ細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化之間的關(guān)系有重要的價(jià)值，為探索鞏固抗病毒治療效果、清除HIV病毒庫(kù)的新途徑打下基礎(chǔ);并期待開(kāi)發(fā)新的治療方法以增強(qiáng)接受HAART治療患者的抗病毒免疫反應(yīng)。
　　第一部分中國(guó)HIV感染者接受48周HARRT的外周血T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞內(nèi)HIV-1 DNA定量檢測(cè)及其與外周血HIV-1 RN

4、A、CD4+T細(xì)胞數(shù)的關(guān)系
　　目的:觀察外周血T淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞是否可能作為HIV-1病毒儲(chǔ)存庫(kù)細(xì)胞，并觀察接受48周抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)的中國(guó)HIV-1感染人群中，這兩種細(xì)胞HIV DNA的動(dòng)態(tài)變化，及其與主要的免疫學(xué)指標(biāo)（外周血CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)）和病毒學(xué)指標(biāo)（血漿HIV-1 RNA水平）的關(guān)系。
　　設(shè)計(jì):在啟動(dòng)抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療前、啟動(dòng)治療后24周和48周三個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)慢性HIV-1感染患者血液HIV

5、-1 RNA病毒載量、CD4+T細(xì)胞數(shù)量、單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞內(nèi)的HIV-1DNA水平，及其兩兩之間的關(guān)系。
　　方法:2009年6月至2010年6月之間啟動(dòng)HAART的35例慢性HIV-1感染的成人參加了這項(xiàng)研究，其中24名為男性，11名為女性，年齡介于20歲至62歲之間，平均(39.5±10)歲。研究期間所有患者沒(méi)有發(fā)生機(jī)會(huì)性感染或其他影響免疫反應(yīng)（如各亞群T細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)量或細(xì)胞因子水平）的疾病。簽署知情同意書(shū)后，每位患者

6、均在基線(xiàn)（0周）、24周和48周時(shí)留取20毫升外周全血。使用流式細(xì)胞儀測(cè)定T細(xì)胞亞群數(shù)量，使用磁珠分選法從外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中分離出T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，用人DNA試劑盒提取DNA。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)基線(xiàn)（0周）、24周和48周時(shí)的血清HIV-1 RNA、CD3+和CD14+細(xì)胞的HIV-1DNA。使用SPSSv18軟件對(duì)收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:35名從未接受過(guò)抗病毒治療的慢性HIV-1感染的成年患者被

7、納入研究。在HAART啟動(dòng)的0周、24周和48周，外周血平均HIV-1 RNA水平分別為4.18+1.1（Log10拷貝/ml）、≤1.69（Log10拷貝/ml）和≤1.69(Log10拷貝/ml);平均CD4+T細(xì)胞數(shù)分別為204.42±97個(gè)/μl,336.65+101個(gè)/μl和394.37±141個(gè)/μl。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，HIV-1RNA水平和CD4+T細(xì)胞數(shù)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。在HAART啟動(dòng)的0月、24周和48周，在T淋巴細(xì)胞中H

8、IV-1 DNA水平分別為3.62±0.65(Log10拷貝/106細(xì)胞)、2.91±0.49(Log10拷貝/106細(xì)胞)和2.37±0.39(Log10拷貝/106細(xì)胞);在單核細(xì)胞中HIV-1 DNA水平分別為2.78±0.71(Log10拷貝/106細(xì)胞)、2.015±0.27(Log10拷貝/106細(xì)胞)和1.99±0.206(Log10拷貝/106細(xì)胞)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，外周血HIV-1RNA水平和T淋巴細(xì)胞中的HIV-1

9、DNA水平及單核細(xì)胞中的HIV-1DNA水平均呈正相關(guān)關(guān)系或變化趨勢(shì)相同。詳細(xì)的數(shù)據(jù)分析表明，單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞中的HIV-1 DNA水平下降速度明顯遲緩于外周血HIV-1 RNA，且T淋巴細(xì)胞中的HIV-1 DNA水平下降更慢于單核細(xì)胞中HIV-1 DNA下降的速度。統(tǒng)計(jì)分析表明，不管在HAART啟動(dòng)前還是HAART中，外周血CD4+T細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞HIV-1DNA載量均呈負(fù)相關(guān)性或變化趨勢(shì)相反;但是CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和單核細(xì)胞H

10、IV-1 DNA水平?jīng)]有發(fā)現(xiàn)明顯的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)論:
　　1、接受抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)48周，使HIV-1感染者外周血HIV-1 RNA水平明顯下降，外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)量明顯上升，二者呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　2、發(fā)現(xiàn)中國(guó)HIV-1感染者血T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞可能作為HIV-1的病毒儲(chǔ)存庫(kù)。在HAART48周中，隨著外周血HIV-1 RNA水平逐步下降，同時(shí)T淋巴細(xì)胞HIV-1 DNA和單核細(xì)胞HIV-1

11、 RNA逐步減少;T淋巴細(xì)胞中HIV-1 DNA和血漿HIV-1 RNA水平正相關(guān)，單核細(xì)胞中的HIV-1 DNA和血漿HIV-1 RNA載量呈相同的變化方向。
　　3、觀察到HAART治療中，中國(guó)HIV-1感染者的外周血HIV-1RNA水平、單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞中的HIV-1 DNA水平以及細(xì)胞中仍可檢測(cè)到HIV-1 DNA的百分比都在同步下降，但是單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞中的HIV-1 DNA水平下降的速度明顯遲緩于外周血HIV-

12、1 RNA，且T淋巴細(xì)胞中的HIV-1 DNA水平下降更慢于單核細(xì)胞中HIV-1 DNA下降的速度。提示這兩種細(xì)胞都作為HIV pro-DNA的儲(chǔ)存庫(kù)，而T淋巴細(xì)胞起更主要的作用。國(guó)內(nèi)罕見(jiàn)同樣的報(bào)告。
　　4、觀察到無(wú)論在HAART啟動(dòng)前還是HAART期間，中國(guó)HIV-1感染者的外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)量與T淋巴細(xì)胞HIV-1 DNA載量均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系;提示T淋巴細(xì)胞中HIV-1 DNA水平與病情進(jìn)展有關(guān)，也可以作為判斷AIDS疾病

13、程度的觀察指標(biāo)之一。但是，在HAART啟動(dòng)前后的CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和單核細(xì)胞HIV-1 DNA水平未見(jiàn)明顯的關(guān)聯(lián)。國(guó)內(nèi)罕見(jiàn)同樣的報(bào)告。
　　第二部分γ鏈細(xì)胞因子參與HAART抗病毒免疫反應(yīng)及其在控制HIV病毒庫(kù)中的作用
　　背景:盡管高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療（HAART）能有效降低艾滋病病毒(HIV)的復(fù)制，但即使在病毒血癥得到明顯控制的患者中，CD4+T細(xì)胞的復(fù)常和免疫重建也并不都是一帆風(fēng)順的，同時(shí)HIV病毒庫(kù)的清除還任重道遠(yuǎn)

14、。近年來(lái)對(duì)γ鏈細(xì)胞因子研究的增多使人們更多地了解γ細(xì)胞因子的生物學(xué)特性，及其在始動(dòng)、維持與調(diào)節(jié)機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)、參與抗病毒免疫反應(yīng)和炎癥過(guò)程的關(guān)鍵作用，同時(shí)也在探索其在HIV病毒庫(kù)的建立和清除中可能扮演的角色。以期待開(kāi)發(fā)新的策略以增強(qiáng)接受HAART治療患者的抗病毒免疫反應(yīng)，和新的清除HIV病毒庫(kù)的途徑。
　　目的:觀察常見(jiàn)的γ鏈細(xì)胞因子(IL-2、IL-7和IL-21)在中國(guó)HIV-AIDS短期抗病毒治療中的動(dòng)力學(xué)變化及可能的作用，分

15、析三者與主要的病毒學(xué)指標(biāo)、免疫學(xué)指標(biāo)和病毒庫(kù)的變化相關(guān)性及其意義。
　　材料與方法:35名符合高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)指南標(biāo)準(zhǔn)的慢性HIV-1感染者被納入研究，進(jìn)行一年的隨訪(fǎng)研究。簽署知情同意書(shū)后，在基線(xiàn)、第0周、第24周、第48周每例患者抽取20ml抗凝全血。每例取2ml血清保存于-80℃?zhèn)溆?用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(ebioscience)測(cè)定血清中IL-2、IL-7和IL-21的濃度，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+和C

16、D8+T細(xì)胞數(shù)，實(shí)時(shí)PCR測(cè)定血清中HIV-1RNA水平。
　　結(jié)果:啟動(dòng)HAART后0周、24周和48周檢測(cè)的35例平均IL-2濃度分別為9.67±2.60、15.14±4.40和19.81±3.31(pg/ml)，IL-21濃度分別為75.05±25.53、100.49±48.65和130.56±46.88(pg/ml)，IL-7濃度分別為81.74±20.47、22.01±13.58和8.36±2.16(pg/ml)。結(jié)合本

17、文第一部分檢測(cè)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理顯示:治療前明顯低于正常對(duì)照組的IL-2水平和IL-21水平，在經(jīng)過(guò)48周治療后顯著升高，而在HAART治療前明顯高于正常對(duì)照組的IL-7水平在48周治療后則顯著降低。IL-2水平和IL-21水平在HAART的0周、24周和48周與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)關(guān)系或同步增長(zhǎng)，而平均IL-7水平在HAART的0周、24周和48周與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示負(fù)相關(guān)關(guān)系或無(wú)明顯相關(guān)性。在未HAART時(shí)平均IL-2水平和

18、HIV-1 RNA病毒載量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，平均IL-7水平和IL-21水平和HIV-1 RNA病毒載量關(guān)系不明顯。在HAART48周時(shí)血IL-2水平和T淋巴細(xì)胞HIV-1 DNA病毒載量呈明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系，在HAART的0周、24周與48周時(shí)IL-7水平和T淋巴細(xì)胞HIV-1 DNA病毒載量的關(guān)系都不明顯，而HAART0周時(shí)平均IL-21水平和T淋巴細(xì)胞HIV-1 DNA病毒載量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論:48周HAART治療中IL-