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文檔簡介
1、目的:
可溶性人類白細胞G抗原(Soluble Human Leukocyte Antigen G, sHLA-G)、免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄子2/4(Immunoglobulin-like transcript receptor2/4,ILT2/4)及白細胞介素10(Interleukin10,IL10)是重要的免疫抑制性分子,能夠控制免疫細胞激活及各種自身反應的應答。本研究檢測類風濕性關節(jié)炎(Rheumatoid Arthri
2、tis,RA)病人外周血血漿中免疫抑制性分子sHLA-G、IL10的水平及ILT2/4在各類免疫細胞上表達的變化,不僅探討三者之間的相關性、還將探討三者與RA患者DAS28得分(Disease Activity Score28)、病程、臨床用藥的相關性,為進一步揭示RA發(fā)生發(fā)展的機制提供線索、以及探討其臨床應用的潛在價值。
方法:
1.依據(jù)1987年美國風濕病協(xié)會對RA的診斷標準,選擇46例RA患者及41例年
3、齡和性別相匹配的健康對照。采集血液后收集其臨床及實驗室資料,如年齡,性別,病程,臨床用藥,關節(jié)腫痛數(shù)量,及血清類風濕因子(RheumatoidFactor, RF)、血沉(Erythrocyte Sedimentation Rate,ESR)、C反應蛋白(C-Reactive Protein,CRP)、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(Anti-Cyclic Citrullinated Peptideantibody, anti-CCP)和抗核抗體(A
4、nti-Nuclear Antibody, ANA)等數(shù)據(jù)結(jié)果。
2.流式細胞術(shù)檢測新鮮外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)表面ILT2/4表達的百分率及熒光強度(mean relative fluorescenceintensity, MRFI)。研究其與疾病活動度DAS28得分、病程、臨床用藥以及實驗室參數(shù)等的關聯(lián)性。
3.收集剩余全血離心后
5、的血漿,酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked ImmunosorbentAssay,ELISA)檢測血漿中的sHLA-G及IL10的表達水平。研究它們與各類PBMCs表面ILT2/4表達的關聯(lián)性、研究它們與疾病活動度DAS28得分、病程、臨床用藥以及實驗室參數(shù)等的關聯(lián)性。
4.統(tǒng)計分析:計量資料進行正態(tài)性檢驗,符合正態(tài)分布的資料用(x)±S表示,組間比較采用t檢驗;非正態(tài)分布的計量資料用中位數(shù)(M)和四分位數(shù)間距(Q
6、25-Q75)表示,組間比較采用Mann-Whitney U檢驗;計量資料間的相關性檢驗采用Spearman秩相關分析。檢驗水準均為α=0.05。
結(jié)果:
1.RA患者CD3+T細胞上表達的ILT2平均相對熒光強度顯著高于健康對照組(P<0.05),且CD3+T細胞上表達的ILT2平均相對熒光強度與DAS28得分顯著相關,尤其表現(xiàn)為RA高/中疾病活動度組CD3+T細胞上表達的ILT2平均相對熒光強度顯著高于低
7、疾病活動度組(P<0.05);但并未發(fā)現(xiàn)與RA病程、臨床用藥及實驗室參數(shù)存在顯著相關(均P>0.05)。
2.RA患者CD56+NK細胞中ILT2陽性表達細胞的百分比顯著高于健康對照組(P<0.05);且RA高/中疾病活動度組CD56+NK中ILT2陽性表達細胞的百分比顯著高于低疾病活動度組CD56+NK中ILT2陽性表達細胞的百分比(P<0.05);但并未發(fā)現(xiàn)CD56+NK中ILT2陽性表達細胞的百分比與RA病程、臨床用
8、藥及實驗室參數(shù)存在顯著相關(均P>0.05)。
3.CD14+單核細胞、CD19+B細胞表面表達ILT2/4的百分比、熒光強度與健康對照組無顯著性差異(均P>0.05),并未發(fā)現(xiàn)與RA疾病活動度DAS28得分、病程、臨床用藥及實驗室參數(shù)存在顯著相關(均P>0.05)。
4.RA患者與健康對照組血漿中sHLA-G分子表達水平無顯著性差異(中位數(shù):59 U/ml vs53 U/ml,P>0.05),并未發(fā)現(xiàn)sHL
9、A-G表達與RA疾病活動度DAS28得分、病程、臨床用藥及實驗室參數(shù)存在顯著相關(均P>0.05)。雖然sHLA-G表達與抑制性受體ILT2/4在T、B、NK淋巴細胞及單核細胞上的表達均不相關,但是血漿中sHLA-G與IL10的表達水平之間弱相關(P<0.05)。
5.RA患者血漿中IL10分子表達水平顯著高于健康對照組(中位數(shù):90 ng/mL vs5 ng/mL,P<0.05),但并未發(fā)現(xiàn)IL10表達與RA疾病活動度D
10、AS28得分、病程、臨床用藥及實驗室參數(shù)間存在顯著相關(均P>0.05)。本實驗發(fā)現(xiàn),不僅血漿中IL10與sHLA-G的表達水平之間存在弱相關,而且IL10也與CD3+T細胞、CD19+B細胞、CD56+NK細胞上表達的抑制性受體ILT2存在弱相關(均P<0.05)。
結(jié)論:
類風濕性關節(jié)炎患者外周血免疫細胞表達ILT2的百分比及熒光強度均異常升高,CD3+T細胞上表達的ILT2平均相對熒光強度、CD56+N
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