EPO預(yù)處理對(duì)LIR大鼠肝臟微循環(huán)的保護(hù).pdf

1、目的：通過建立大鼠雙后肢肢體缺血再灌注損傷（1imb Ischemia Reperfusion Injury，LIRI）模型，觀察促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）預(yù)處理對(duì) LIRI后的大鼠肝臟及肝臟微循環(huán)的保護(hù)作用。探究缺血再灌注損傷（Ischemia Reperfusion Injury，IRI）后活體的大鼠肝臟微循環(huán)血流量變化、肝臟組織中內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide sy

2、nthase，eNOS）蛋白含量水平的區(qū)別、氧化應(yīng)激（Oxidative Stress）損傷程度、肝臟組織形態(tài)變化等。探討這一系列變化與EPO對(duì)肝臟微循環(huán)保護(hù)作用的相關(guān)性，初步證明EPO預(yù)處理在LIRI中對(duì)肝臟微循環(huán)的保護(hù)作用。
　　方法：實(shí)驗(yàn)用45只健康成年雄性 SD大鼠，制作大鼠雙后肢缺血再灌注模型。采用隨機(jī)數(shù)表法將大鼠平均分為3組（n=15）：對(duì)照組（Control組）；缺血再灌注組（IR組）；EPO預(yù)處理組（EPO+IR組

3、）。本實(shí)驗(yàn)采用缺血4小時(shí)，再灌注2小時(shí)的方法。于再灌注前30min對(duì) EPO+IR組的大鼠腹腔注射重組人促紅細(xì)胞生成素（recombinant human erythropoietin，rhEPO）3000U/kg，Control組和IR組大鼠則腹腔注射等量的生理鹽水。用激光多普勒活體觀察各組大鼠肝臟微循環(huán)血流量改變情況；光學(xué)顯微鏡觀察HE染色后的大鼠肝臟組織的形態(tài)變化；檢測(cè)血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量；血漿和肝

4、臟組織中超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，SOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量；免疫組織化學(xué)染色觀察肝臟組織中 eNOS的表達(dá)情況；蛋白免疫印跡法（Westernblot）檢測(cè)肝臟組織中eNOS蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1）激光多普勒活體觀察各組大鼠肝臟微循環(huán)血流量，IR組較 Control組肝臟微循環(huán)血流量明顯降低，EPO+IR組肝臟微循環(huán)血流量雖也一定程度上降低，

5、但是明顯高于IR組。提示EPO預(yù)處理提高了LIRI后肝臟微循環(huán)血流量。2）HE染色觀察到大鼠肝臟組織，Control組肝臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，IR組動(dòng)物肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝血竇變窄，部分肝組織出現(xiàn)肝血竇及中央靜脈不同程度的淤血，炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變，EPO+IR組中各種病理改變較 IR組減輕。3）與 Control組相比，IR組和EPO+IR組血漿中 ALT、AST水平均明顯升高（P＜0.01），但EPO+IR組血漿中 ALT、AST水

6、平較 IR組均有所降低（P＜0.01）。說明 EPO預(yù)處理組的肝臟功能一定程度上得到了保護(hù)。4）與 Control組相比，IR組和EPO+IR組的肝臟組織和血漿中 SOD活力下降明顯（P＜0.01），MDA含量明顯升高（P＜0.05）。但 EPO+IR組較 IR組 SOD活力升高（P＜0.05），MDA含量降低（P＜0.05）。提示 EPO預(yù)處理減輕了脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。5）肝臟免疫組織化學(xué)染色顯示，IR組和EPO+IR組肝臟組織中均有eN

7、OS蛋白棕黃色染色顆粒（P＜0.01），EPO+IR組較IR組棕黃色染色更為明顯（P＜0.05）。6） Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，EPO+IR組肝臟組織中 eNOS蛋白表達(dá)水平最高，其次是IR組，這兩組中eNOS表達(dá)水平均高于Control組，且差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。說明EPO在LIRI的肝臟組織中更加促進(jìn)了eNOS的活化和表達(dá)。
　　結(jié)論： EPO預(yù)處理可以減輕大鼠 LIR肝臟的損傷，其機(jī)制可能與減輕