肺高壓大鼠肺動脈平滑肌細胞TRPM8介導的Ca2+信號變化.pdf

1、目的:研究瞬時感受器電位M8(TransientReceptorPotentialMelastatin8,TRPM8)通道在慢性缺氧(ChronicHypoxia,CH)和野百合堿(Monocrotaline,MCT)誘發(fā)肺高壓(PulmonaryHypertension,PH)模型過程中介導的Ca2+信號變化,為肺高壓的防治提供新的靶方向。
　　方法:SD大鼠分別采用慢性低氧和野百合堿(50mg/kg)一次性腹腔注射法建立肺高壓

2、模型,觀察以下指標:①平均右心室壓(mRVP)、右心室收縮壓(RVSP)和右心室重量指數(RVMI);②肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)的培養(yǎng),并用免疫組化證實TRPM8的細胞表達;③在正常對照組(CON組),CH組,MCT組,分別觀察Mn2+內流速率和幅度,比較不同預處理對基礎鈣內流的影響;并觀察TRPM8特異性激動劑薄荷醇(MT,300μM/L)對Mn2+內流速率和幅度的影響;④CON組,CH組,MCT組觀察比較,在正常Ca2+和無

3、Ca2+_Tyrode液中,MT觸發(fā)的PASMCs的胞漿游離鈣濃度([Ca2+]i)變化,以及BCTC的影響。
　　結果:
　　①與CON組相比,CH和MCT組的mRVP、RVSP、RVMI均明顯增高(P<0.01),提示2種肺高壓模型制備成功。
　　②成功培養(yǎng)大鼠PASMCs,免疫組化證實PASMCs細胞上存在TRPM8。
　?、跜ON組,在正常Ca2+和無Ca2+-Tyrode液中,MT觸發(fā)PASMCs的[C

4、a2+]i增高存在不同(P<0.01),在正常Ca2+-Tyrode液,TRPM8阻斷劑BCTC可以阻斷MT所觸發(fā)PASMCs的[Ca2+]i增高(P<0.01),無Ca2+-Tyrode液中,BCTC也可以阻斷MT所觸發(fā)PASMCs的[Ca2+]i升高(P<0.01),提示正常PASMCs上,TRPM8介導的[Ca2+]i效應既有胞外Ca2+又有胞內Ca2+的參與。
　?、芘cCON組相比,在正常Ca2+和無Ca2+-Tyrode

5、液中,CH組和MCT組MT觸發(fā)PASMCs的[Ca2+]i增高都分別顯著減小(P<0.01);在正常Ca2+和無Ca2+-Tyrode液中,MT所觸發(fā)的PASMCs[Ca2+]i增高也被BCTC分別顯著抑制(P<0.01)。提示CH和MCT預處理減少了PASMCs上TRPM8介導的[Ca2+]i增高。
　　⑤與CON組相比,無Ca2+-Tyrode液中,CH組和MCT組的基礎Mn2+內流速率和幅度均增大(P<0.05),提示CH組

6、和MCT組預處理使PASMCs上非特異性陽離子通道介導的Ca2+內流增強,在細胞水平證實了2種肺高壓模型制備成功。
　?、夼cCON組相比:無Ca2+-Tyrode液中,CH組和MCT組MT所觸發(fā)的Mn2+內流速率和幅度均明顯減小(P<0.01);在正常Ca2+-Tyrode液中,MT所觸發(fā)的PASMCs[Ca2+]i增高也被BCTC顯著抑制(P<0.01)。提示CH和MCT預處理下調了PASMCs上TRPM8介導的Ca2+內流。<