柴樸湯對支氣管哮喘豚鼠嗜酸性粒細胞凋亡及調(diào)控基因Fas,Fas-L,Bcl-2表達的影響.pdf

1、目的：通過建立支氣管哮喘豚鼠模型，觀察中藥柴樸湯對哮喘豚鼠支氣管肺組織中嗜酸性粒細胞凋亡及調(diào)控基因Fas,Fas-L,Bcl-2表達的影響，探討柴樸湯促進支氣管哮喘嗜酸性粒細胞凋亡的可能機制。
　　方法：健康雄性英國短毛種豚鼠40只，按隨機數(shù)字表法，將實驗豚鼠隨機分為4組，正常對照組，哮喘模型組，地塞米松組，柴樸湯組，每組10只。采用卵蛋白（OVA）致敏和反復激發(fā)復制豚鼠的哮喘模型。末次霧化吸入后，針對各組豚鼠的癥狀表現(xiàn)進行行為體

2、征評分；檢測各組豚鼠血液中嗜酸性粒細胞數(shù)及支氣管肺泡灌洗液中白細胞數(shù)，嗜酸性粒細胞數(shù)，嗜酸性粒細胞比例；蘇木素-伊紅染色法觀察各組豚鼠支氣管肺組織病理改變；TUNEL法檢測各組豚鼠支氣管肺組織中嗜酸性粒細胞凋亡；免疫組化、Western Blot檢測各組豚鼠支氣管肺組織中Fas,Fas-L,Bcl-2蛋白表達；原位雜交、RT-PCR檢測各組豚鼠支氣管肺組織中Fas,Fas-L,Bcl-2 mRNA表達。
　　結(jié)果：⑴各組豚鼠支氣管

3、哮喘癥狀評分與哮喘模型組比較，地塞米松組、柴樸湯組兩組豚鼠哮喘癥狀明顯改善，哮喘癥狀積分明顯降低（P﹤0.05）。⑵各組豚鼠外周血中嗜酸性粒細胞計數(shù)與正常對照組比較，哮喘模型組外周血中嗜酸性粒細胞計數(shù)明顯增高，差異顯著（P＜0.01）；與哮喘模型組比較，地塞米松組、柴樸湯組外周血中嗜酸粒細胞計數(shù)均明顯降低（P＜0.05）；地塞米松組、柴樸湯組兩組比較，無顯著性差異（P＞0.05）。⑶各組豚鼠BALF中白細胞計數(shù)，嗜酸性粒細胞比例，嗜酸性

4、粒細胞計數(shù)哮喘模型組 BALF中白細胞數(shù)，嗜酸性粒細胞比例，嗜酸性粒細胞數(shù)，均高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；地塞米松組、柴樸湯組兩組，BALF中白細胞數(shù)，嗜酸性粒細胞比例，嗜酸性粒細胞數(shù)均低于哮喘模型組（P＜0.05），但高于正常對照組（P＜0.05）。⑷各組豚鼠支氣管肺組織病理改變正常對照組支氣管肺組織結(jié)構正常完整，管腔光滑，氣道黏膜無水腫，上皮細胞未見明顯增生，偶見嗜酸粒細胞浸潤，肺泡間隔完整正常。哮喘模型組支氣

5、管管腔狹窄變形，可見黏膜明顯水腫，上皮細胞大量增生、脫落，黏液分泌明顯增多，支氣管平滑肌增生肥厚，支氣管黏膜層與血管周圍以嗜酸性粒細胞為主的大量炎性細胞浸潤，肺泡間隔變厚，結(jié)構紊亂。地塞米松組、柴樸湯組兩組支氣管肺組織病理改變明顯輕于哮喘模型組。⑸TUNEL法檢測各組豚鼠支氣管肺組織中EOS凋亡與正常對照組比較，哮喘模型組支氣管肺組織中存在大量嗜酸性粒細胞浸潤，嗜酸性粒細胞凋亡指數(shù)顯著降低（P＜0.01）；與哮喘模型組比較，地塞米松組、

6、柴樸湯組凋亡的嗜酸性粒細胞明顯增加，凋亡指數(shù)顯著增高（P＜0.01）；地塞米松組與柴樸湯組相比較，無明顯統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。⑹各組豚鼠支氣管肺組織中 Fas、Fas-L、Bcl-2蛋白表達免疫組化結(jié)果顯示地塞米松組、柴樸湯組 Fas、Fas-L蛋白表達均較哮喘模型組明顯增加（P＜0.05）；與正常對照組比較，哮喘模型組豚鼠支氣管肺組織Bcl-2蛋白陽性表達顯著增加（P＜0.01），地塞米松組、柴樸湯組，均較模型組明顯降低（P＜0

7、.05）。Western Blot結(jié)果顯示地塞米松組、柴樸湯組均較哮喘模型組支氣管肺組織 Fas、Fas-L蛋白表達顯著增加（P＜0.01）；與正常對照組比較，哮喘模型組豚鼠支氣管肺組織 Bcl-2蛋白表達顯著增加（P＜0.01），地塞米松組、柴樸湯組，均較模型組明顯降低（P＜0.05）。地塞米松組與柴樸湯組相比較，無明顯統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。⑺各組豚鼠支氣管肺組織中Fas、Fas-L、Bcl-2 mRNA表達原位雜交結(jié)果顯示與哮

8、喘模型組比較，地塞米松組、柴樸湯組支氣管肺組織中 Fas、Fas-L mRNA陽性表達明顯增加(P＜0.05)；哮喘模型組豚鼠支氣管肺組織 Bcl-2 mRNA陽性表達較正常對照組顯著增加（P＜0.01）；地塞米松組、柴樸湯組，均較模型組明顯降低（P＜0.05）。RT-PCR結(jié)果顯示：地塞米松組、柴樸湯組支氣管肺組織中Fas、Fas-L mRNA表達較哮喘模型組顯著增加（P＜0.01），較正常對照組亦明顯增加（P＜0.05）；與正常對照

9、組比較，哮喘模型組豚鼠支氣管肺組織 Bcl-2 mRNA表達顯著增加（P＜0.01）；地塞米松組、柴樸湯組，均較模型組明顯降低（P＜0.05）。地塞米松組與柴樸湯組相比較，無明顯統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：①柴樸湯可以明顯降低哮喘豚鼠外周血和支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性粒細胞數(shù)，減輕支氣管肺組織的炎癥反應。②柴樸湯可以促進哮喘豚鼠支氣管肺組織中嗜酸性粒細胞凋亡。③柴樸湯可以促進哮喘豚鼠支氣管肺組織中Fas，F(xiàn)as-L mR