喉鱗狀細(xì)胞癌特征性microRNA表達(dá)譜的研究.pdf

1、占人類基因1％的microRNA（miRNA）幾乎調(diào)節(jié)著至少30％的mRNA，它們通過(guò)調(diào)控相關(guān)靶基因mRNA的表達(dá)水平影響腫瘤細(xì)胞的表型。喉癌是最常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤，也是僅次于肺癌的呼吸道第二高發(fā)癌。目前，尚少見(jiàn)有喉癌的miRNA特征性表達(dá)譜或與其生物學(xué)行為相關(guān)的差異表達(dá)miRNA的研究報(bào)道。
　　 本項(xiàng)研究采用基于基因芯片技術(shù)的miRNA表達(dá)譜的分析方法，分別以福爾馬林固定石蠟包埋（formalin-fixed and pa

2、raffin-embedded，F(xiàn)FPE）組織和新鮮凍存組織為研究材料，以獲得喉鱗狀細(xì)胞癌特征性的miRNA表達(dá)譜型；進(jìn)而篩選出與喉鱗癌生物學(xué)特征密切相關(guān)的差異表達(dá)miRNA。同時(shí)比較從FFPE和新鮮凍存兩種組織材料中所獲得的喉鱗癌miRNA表達(dá)譜的差異，評(píng)價(jià)FFPE組織miRNA表達(dá)譜分析的有效性和可行性。這項(xiàng)研究的遠(yuǎn)期目標(biāo)為，從上述“分子變化譜型”中篩選出具有鑒別意義的miRNA，對(duì)喉癌發(fā)生與發(fā)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估預(yù)測(cè)，

3、以輔助診斷和指導(dǎo)治療。
　　 首先，應(yīng)用Agilent公司的人類miRNA芯片，針對(duì)24例喉鱗癌FFPE組織樣品以及8例新鮮凍存的喉鱗癌患者配對(duì)癌組織和癌旁組織樣品的總RNA進(jìn)行了miRNA表達(dá)譜檢測(cè)。繼而，采用基因芯片分析軟件GeneSpring和統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件R project分析了上述miRNA芯片的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，從24例喉鱗癌FFPE織標(biāo)本中鑒定到319個(gè)miRNA，其中96個(gè)miRNA在全部24例中均有表達(dá)；從8例喉

4、鱗癌新鮮凍存癌組織標(biāo)本中鑒定到342個(gè)miRNA，其中161個(gè)miRNA在全部8例中均有表達(dá)；從而初步獲得喉鱗癌的miRNA表達(dá)譜。在FFPE組織中檢測(cè)到的319個(gè)miRNA信號(hào)中有233個(gè)也能在新鮮凍存喉癌組織中檢測(cè)到；在FFPE組織中檢測(cè)到的79個(gè)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（p<0.05）的miRNA中有16個(gè)也在新鮮凍存喉癌組織中發(fā)現(xiàn)的與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的52個(gè)miRNA中出現(xiàn)，這16個(gè)miRNA包括miR-17、miR-130b、miR-1

5、83、miR-30b、miR-20a、miR-96、miR-188-5p等；從而確認(rèn)了上述FFPE組織miRNA表達(dá)譜分析的有效性。進(jìn)而采用檢錯(cuò)率FDR<0.05進(jìn)行校正，以篩選FFPE組織樣品中顯著差異表達(dá)的miRNA，獲得5個(gè)與喉鱗癌淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的差異表達(dá)miRNA：miR-23a*、miR-28-5p、miR-15a、miR-16和miR-425。
　　 本項(xiàng)研究表明，具有不同生物學(xué)行為的喉鱗癌之間存在miRNA的差異