異丙酚預(yù)處理對(duì)大鼠心肺復(fù)蘇后腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、背景:
　　窒息性心跳驟停是麻醉過程中嚴(yán)重的意外,心跳停止后腦組織處于嚴(yán)重的缺血缺氧狀態(tài),心肺復(fù)蘇(CPR)成功后大部分患者常伴隨嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙。然而由于缺乏對(duì)其機(jī)制的全面認(rèn)識(shí),目前還缺少有效的防治方法。異丙酚是臨床上廣泛應(yīng)用的一種靜脈麻醉藥物,臨床試驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均表明異丙酚預(yù)處理對(duì)腦缺血性損傷具有顯著的保護(hù)作用,但其對(duì)于復(fù)蘇后腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)制還不清楚。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,小膠質(zhì)細(xì)胞是一類重要的免疫監(jiān)視細(xì)胞。在炎癥或損傷時(shí)

2、,小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)被激活。研究提示,小膠質(zhì)細(xì)胞的活化可能與復(fù)蘇后的腦損傷有關(guān)。同時(shí),離體研究證實(shí),異丙酚對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化具有抑制作用。本研究采用大鼠窒息模型,綜合利用分子生物學(xué)、形態(tài)學(xué)、免疫組織化學(xué)等方法,研究了小膠質(zhì)細(xì)胞活化在心跳驟停后腦損傷發(fā)生過程中的作用,同時(shí)觀察異丙酚預(yù)處理對(duì)復(fù)蘇后腦損傷的作用以及對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響,從而在進(jìn)一步闡明異丙酚的腦保護(hù)機(jī)制的同時(shí),為圍手術(shù)期心肺復(fù)蘇后的腦保護(hù)開辟新的途徑。
　　目的:
　

3、　探討異丙酚預(yù)處理在心肺復(fù)蘇后腦損傷中的作用和機(jī)制。
　　方法:
　　(1)建立大鼠窒息性心跳驟停模型;(2)運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方式檢測(cè)復(fù)蘇后小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物OX-42的表達(dá)變化;(3)進(jìn)一步用Westernblot觀察復(fù)蘇后小膠質(zhì)細(xì)胞活化標(biāo)記物Iba1的表達(dá)水平;(4)運(yùn)用免疫熒光雙重標(biāo)記方法觀察P2X7R、p-p38分別和OX-42的雙重標(biāo)記情況;(5)Westernblot檢測(cè)復(fù)蘇后P2X7R、p-p38的表達(dá)變化;(

4、6)Morris水迷宮檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑米諾環(huán)素對(duì)復(fù)蘇后學(xué)習(xí)記憶功能的影響;(7)Westernblot進(jìn)一步研究米諾環(huán)素對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活性的影響;(8)Westernblot檢測(cè)米諾環(huán)素對(duì)復(fù)蘇后caspase-3表達(dá)的影響;(9)水迷宮檢測(cè)異丙酚預(yù)處理對(duì)復(fù)蘇后學(xué)習(xí)記憶能力的影響;(10)免疫組織化學(xué)檢測(cè)異丙酚預(yù)處理后小膠質(zhì)細(xì)胞活化標(biāo)記物OX42的表達(dá)變化;(11)Westernblot檢測(cè)異丙酚預(yù)處理后P2X7R、p-p38的表達(dá)變化

5、;(12)Westernblot檢測(cè)異丙酚對(duì)復(fù)蘇后caspase-3的表達(dá)的改變;(13)組織學(xué)檢測(cè)異丙酚對(duì)復(fù)蘇后海馬神經(jīng)元損傷的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)窒息性心跳驟停可引起海馬CA1區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞OX42表達(dá)的明顯升高;(2)復(fù)蘇組海馬中小膠質(zhì)細(xì)胞的蛋白水平標(biāo)記物Iba1顯著上調(diào);(3)P2X7R僅表達(dá)于活化的小膠質(zhì)細(xì)胞;(4)磷酸化p38高表達(dá)于活化的小膠質(zhì)細(xì)胞;(5)米諾環(huán)素可抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化,減輕復(fù)蘇后的學(xué)習(xí)和

6、記憶功能降低;(6)米諾環(huán)素可抑制復(fù)蘇后大鼠海馬Iba-1的高表達(dá);(7)米諾環(huán)素可降低復(fù)蘇后海馬caspase-3的高表達(dá);(8)異丙酚預(yù)處理可有效減輕復(fù)蘇后的學(xué)習(xí)和記憶功能損傷;(9)異丙酚預(yù)處理可顯著降低復(fù)蘇后P2X7R的表達(dá)上調(diào);(10)異丙酚預(yù)處理可抑制復(fù)蘇后p-p38的表達(dá);(11)異丙酚可抑制復(fù)蘇后caspase-3的高表達(dá);(12)異丙酚可明顯緩解復(fù)蘇后海馬CA1區(qū)的神經(jīng)元數(shù)量減少。
　　結(jié)論:
　　(1)窒

7、息性心跳驟停大鼠復(fù)蘇成功后,海馬小膠質(zhì)細(xì)胞OX42活躍表達(dá),提示小膠質(zhì)細(xì)胞活化與復(fù)蘇后腦損傷的發(fā)生有密切聯(lián)系。
　　(2)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化與P2X7R和p-p38的高表達(dá)有關(guān),提示P2X7R和p-p38對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化發(fā)揮著重要作用。
　　(3)海馬小膠質(zhì)細(xì)胞的活化對(duì)復(fù)蘇后的學(xué)習(xí)和記憶損傷有著重要影響,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化可減緩復(fù)蘇后引起的學(xué)習(xí)和記憶功能障礙。
　　(4)異丙酚預(yù)處理可抑制復(fù)蘇引起的小膠質(zhì)細(xì)胞活化和減輕