H2S對心肺復(fù)蘇后腦損傷的作用及其機制.pdf

1、目的：1.按照Utstein模式對比分析電刺激法致心臟驟停模型和窒息法致心臟驟停模型的特點。2.初步探討H2S供體NaHS在心肺復(fù)蘇大鼠腦損傷中的作用。3.研究H2S對復(fù)蘇后腦損傷的保護作用與抗炎反應(yīng)的關(guān)系。4.研究H2S對復(fù)蘇后腦損傷的保護作用與凋亡反應(yīng)的關(guān)系。5.研究H2S對復(fù)蘇后腦損傷的保護作用與氧化應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)系。6.研究H2 S的腦保護作用是否于上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia-inducible factor-1, HI

2、F-1)有關(guān)。
　　方法：第一部分分別采用經(jīng)皮電刺激心外膜法制備大鼠心臟驟停模型和窒息法制備大鼠心臟驟停模型,比較兩組大鼠在心臟驟停類型,誘發(fā)心臟驟停時間的差異。第二、三部分采用經(jīng)皮電刺激心外膜法建立大鼠心跳驟停模型,隨機(隨機數(shù)字法)分為4組:(1)假手術(shù)組:僅行麻醉、氣管插管及動靜脈插管操作;(2)CPR組:進行模型制備及復(fù)蘇;(3)CPR+硫氫化鈉(NaHS)組:以NaHS作為H2S供體,在CPR開始前1分鐘經(jīng)股靜脈給予10

3、0μg/kgNaHS,其余操作同CPR組;(4)CPR+AOAA(H2S合成酶CBS抑制劑)組:在CPR開始前1分鐘經(jīng)股靜脈給予20mg/kgAOAA。分別對各組大鼠進行生存率、神經(jīng)缺陷評分和形態(tài)學觀察;用生化法測定各組大鼠在不同時間點腦組織H2S的表達水平,用Elisa方法測定各組大鼠不同時間點腦組織炎性因子TNF-α、IL-1β的表達;用PCR、免疫組化的方法測定各組大鼠腦組織凋亡相關(guān)因子Bax、Bcl-2的表達;用生化法測定各組大

4、鼠腦組織氧化應(yīng)激指標MDA、SOD的變化;用實時定量PCR、Western方法測定各組大鼠缺氧誘導(dǎo)因子-1基因及蛋白的表達。
　　結(jié)果：經(jīng)皮電刺激心外膜法致大鼠心臟驟停模型心臟驟停表現(xiàn)類型多樣,可以表現(xiàn)為室顫、無脈性電活動和心電靜止,窒息法僅表現(xiàn)為無脈性電活動和心電靜止,無室顫發(fā)生;經(jīng)皮電刺激心外膜法致大鼠心臟驟停模型誘發(fā)心臟驟停的時間明顯短于窒息法致心臟驟停模型,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與假手術(shù)組相比,CPR組 TNF

5、-α水平在3h、6h、9h、12h均有明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其含量在6h達到高峰;與 CPR組相比,CPR+NaHS組 TNF-α水平在3h、6h、9h、12h均明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與 CPR組相比,CPR+AOAA組 TNF-α水平在3h、6h均有所增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),在9h、12h有增高趨勢,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與假手術(shù)組相比,CPR組 IL-1β水平在

6、3h、6h、9h、12h均有明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其含量在9h達到高峰;與 CPR組相比,CPR+NaHS組 IL-1β水平在6h、9h、12h明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),在3h有降低趨勢,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與 CPR組相比,CPR+AOAA組 IL-1β水平在3h、6h、9h均有所升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),12h有升高趨勢,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與假手術(shù)組

7、相比,CPR組 Bax表達增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),與 CPR組相比,CPR+NaHS組 Bax表達明顯下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05), CPR+AOAA組表達與 CPR組無明顯差異(P>0.05)。與假手術(shù)組相比,CPR組 Bcl-2基因表達有升高趨勢,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),與 CPR組相比,CPR+NaHS組 Bcl-2基因表達明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),CPR+AOAA組表達下降,

8、差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與假手術(shù)組相比,CPR組 Bax/Bcl-2表達增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),與 CPR組相比,CPR+NaHS組 Bax/Bcl-2表達明顯下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),CPR+AOAA組表達 Bax/Bcl-2表達升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與假手術(shù)組相比,CPR組 SOD活性下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與CPR組相比,CPR+NaHS組 SOD活性增高,

9、差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與 CPR組相比,CPR+AOAA組 SOD活性降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與假手術(shù)組相比,CPR組 MDA活性增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與 CPR組相比,CPR+NaHS組 MDA活性降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與 CPR組相比,CPR+AOAA組 MDA活性升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。實時定量 PCR和Western結(jié)果均顯示 CPR組 HIF-1α

10、基因及蛋白表達水平較假手術(shù)組增高(P<0.05);與 CPR組相比,CPR+NaHS組 HIF-1蛋白表達水平增高(P<0.05);與 CPR組相比,CPR+AOAA組 HIF-1αmRNA表達水平有降低趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：電刺激法所致心臟驟停模型誘導(dǎo)心臟驟停表現(xiàn)類型多樣,誘發(fā)心臟驟停的時間明顯短于窒息法心臟驟停,可作為心臟驟停模型制備的首選。H2S可以減輕大鼠復(fù)蘇后腦損傷,給予H2 S抑制劑AO