舌鱗狀細(xì)胞癌中STAT3調(diào)控miRNA-21表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、口腔頜面-頭頸癌是世界第六大常見癌癥，舌癌為口腔癌中最常見的惡性腫瘤，其中鱗狀細(xì)胞癌占舌癌病理類型的80％以上，因而闡明舌鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)理、尋找更為有效的治療手段是舌癌研究領(lǐng)域的關(guān)鍵問題。
　　 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3(signaltransducersandactivatorsoftranscription3，STAT3)是信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子家族的重要成員。STAT3對(duì)維持正常生理具有重要作用，在正常細(xì)胞和組織中，它的

2、活化狀態(tài)是短暫而且被精確調(diào)控的。STAT3的持續(xù)激活可導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化。研究證實(shí)STAT3在多種惡性腫瘤如乳腺癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌、多發(fā)性骨髓瘤、白血病等均有過度表達(dá)，并與腫瘤的生長(zhǎng)、分化、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。STAT3可被多種細(xì)胞因子(IL-6)、受體酪氨酸激酶(EGFR)和非受體酪氨酸激酶(Jak、Src、Abl等)激活，是多個(gè)致癌性酪氨酸激酶信號(hào)通道的匯聚焦點(diǎn)?；罨腟TAT3相互作用形成同源或異源的二聚體轉(zhuǎn)

3、入細(xì)胞核，參與調(diào)節(jié)與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移相關(guān)的靶基因的轉(zhuǎn)錄。研究顯示在頭頸鱗癌患者中，腫瘤組織和正常組織上皮中STAT3的表達(dá)水平均高于非癌患者正常上皮。提示STAT3信號(hào)通路的持續(xù)激活在人舌鱗狀細(xì)胞癌的進(jìn)展和侵襲中發(fā)揮重要作用。
　　 研究證實(shí)miRNA(microRNA)的表達(dá)與多種癌癥相關(guān)，異常表達(dá)的miRNA在癌癥的發(fā)生發(fā)展過程中起到類似癌基因或抑癌基因的作用。目前，研究發(fā)現(xiàn)多種miRNA在舌癌中表達(dá)失調(diào)并與舌癌的發(fā)

4、生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。miR-21是人類細(xì)胞或組織中發(fā)現(xiàn)較早的、存在較為廣泛的miRNA之一。早期的研究證實(shí)miR-21在膠質(zhì)瘤、肺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)升高;并能夠通過抑制PTEN、PDCD4、TIMP3、TIMP-1、RECK、p53等抑癌基因的翻譯過程參與調(diào)控多種惡性腫瘤的發(fā)生。一項(xiàng)miRNA表達(dá)譜研究結(jié)果提示miR-21在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌和食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系中均為高表達(dá)。另一項(xiàng)舌癌miRNA表達(dá)譜研究同樣表明在103例

5、舌鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本中miR-21為高表達(dá)，反義miR-21能夠抑制舌癌細(xì)胞系SCC-15和Cal-27的生長(zhǎng)。我小組前期研究提示:轉(zhuǎn)染反義miR-21寡核苷酸后，Tb3.1舌癌細(xì)胞增殖與侵襲能力被抑制。上述研究結(jié)果都提示miR-21可能以一種原癌基因的身份影響著舌癌的發(fā)生、進(jìn)展。
　　 近年來miRNA與STAT家族成員的相互關(guān)系，尤其miR-21和STAT3信號(hào)通路的相互作用得到初步闡述。利用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)了miR-21編碼

6、基因啟動(dòng)子區(qū)域有STAT3的結(jié)合位點(diǎn)。編碼miR-21基因的調(diào)節(jié)區(qū)位于跨膜49基因的內(nèi)含子中，并為上游增強(qiáng)子所調(diào)控，而該增強(qiáng)子調(diào)控序列含有兩個(gè)STAT3的結(jié)合位點(diǎn)，推測(cè)IL-6/STAT3抗凋亡信號(hào)通道是miRNA-21潛在的調(diào)控機(jī)制。研究顯示在骨髓瘤細(xì)胞中，miR-21的轉(zhuǎn)錄可受到其上游包含2個(gè)STAT3結(jié)合位點(diǎn)的增強(qiáng)子的直接調(diào)控。敲低STAT3的表達(dá)后發(fā)現(xiàn)可阻礙由IL-6介導(dǎo)的miR-21的表達(dá)。
　　 然而，目前在舌鱗癌中

7、STAT3與miR-21之間的調(diào)控關(guān)系的研究尚未見報(bào)道。本課題通過大量的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究明確在舌鱗狀細(xì)胞癌中STAT3轉(zhuǎn)錄調(diào)控miR-21表達(dá)的分子機(jī)制。共分以下二部分:
　　 第一部分:應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)60例人舌鱗狀細(xì)胞癌不同分化程度的臨床手術(shù)標(biāo)本中STAT3的表達(dá);應(yīng)用原位雜交法檢測(cè)標(biāo)本中miR-21的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)STAT3與miR-21在舌鱗癌中均為異常高表達(dá)，且兩者的表達(dá)間存在正性相關(guān)性。
　　 第二部