卵巢癌患者外周血、腹水和腫瘤組織中γδT細胞的細胞毒活性及TCRδ鏈基因表達多態(tài)性研究.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學碩士學位論文卵巢癌患者外周血、腹水和腫瘤組織中γδT細胞的細胞毒活性及TCRδ鏈基因表達多態(tài)性研究姓名：牛海濤申請學位級別：碩士專業(yè)：免疫學指導教師：何維20000501生里塑塑墨型查蘭堡主蘭些絲墨主苧塑莖：!!：yS／ctl3T細胞對同種異體／自體卵巢上皮癌細胞的細胞毒活性，并研究了hspTO分子對yST細胞殺傷卵巢上皮癌細胞有無影響；采用卵巢上皮癌細胞系SKOV3為靶細胞，在裸鼠體內進行Ty3T細胞的抑瘤實驗；通過逆

2、轉錄聚合酶鏈反應(RT—PCR)在轉錄水平測定了TCRV6主要亞型(V61、V62和V63)在卵巢上皮癌患者外周血及腫瘤浸潤部位的表達；采用基因掃描技術分析了TCRV6各亞型T淋巴細胞的多態(tài)性。結果：通過固相抗體法分離擴增得到了來源于卵巢上皮癌不同組織的的yST細胞：ySTIL(選擇擴增于腫瘤浸潤淋巴細胞)、ySTAL(選擇擴增于腫瘤相關淋巴細胞)和bloody3T細胞(選擇擴增于外周血單個核細胞)，擴增純度在四周內最高可達到95％，細

3、胞數(shù)量可達到108。但不同組織來源的yST細胞擴增到一定純度所需時間有所差別。其擴增純度達到70％的時間順序為：外周JIRyST細胞最快，約14天左右；，／6TAL次之，約2l天左右，75TIL所需時間最長，約28天左右。在y6T細胞建系的同時，進行了原代卵巢上皮癌細胞的同步培養(yǎng)，經鑒定，體外擴增得到的腫瘤細胞為高純度的卵巢上皮癌細胞，同時發(fā)現(xiàn)無論是新建系的卵巢上皮癌細胞還是長期建系的卵巢上皮癌細胞株表面均基本不表達hspTO分子，與所

4、檢測的淋巴瘤細胞系Daudi高表達hsp70有所不同；同時通過抗hsp70抗體對卵巢上皮癌細胞的封閉實驗，發(fā)現(xiàn)抗體封閉前后，諦T細胞對其的殺傷活性無差別，結果顯示yST細胞識別卵巢上皮癌細胞并非通過hsp70識別來實現(xiàn)，可能是靶細胞表面的其他抗原分子所介導的。通過對75／ctl3T細胞體外細胞毒活性的進一步研究發(fā)現(xiàn)擴增的yS／cc[3TIL、yS／ccl3TAL及外周血丫6／ⅨpT細胞對同種異體／自體卵巢上皮癌細胞均具有顯著且水平相近的

5、細胞毒活性。通過裸鼠體內抑瘤實驗，發(fā)現(xiàn)ySTAL對同種異體卵巢上皮癌細胞系SKOV3體內生長有優(yōu)于apTAL的抑制作用。通過基因掃描技術，發(fā)現(xiàn)TCRV5各亞型之間的取用頻率有顯著性差異，同時，卵巢上皮癌患者的TIL、PBMC及正常人PBMC之間表達TCRV5各亞型也有顯著性差異，卵巢上皮癌患者的PBMC和TIL對V53的取用頻率多于正常人PBMC，而正常人PBMC對V52的取用頻率多于卵巢上皮癌患者的PBMC和TIL。通過對T淋巴細胞的