VEGFA和VEGFR2基因遺傳多態(tài)性與上皮性卵巢癌患者臨床預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、目的：卵巢惡性腫瘤作為女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，死亡率居?jì)D科惡性腫瘤之首。其中最常見(jiàn)的卵巢惡性腫瘤為上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC），約占卵巢癌的90％。最新的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，卵巢癌在導(dǎo)致女性死亡的病因中排名第五位。盡管近些年來(lái)卵巢癌的治療手段在不斷改進(jìn)，使得生存率有所提高，但卵巢癌的5年生存率也僅為46%。因其發(fā)病隱匿和進(jìn)展迅速，約70%的患者就診時(shí)已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，這是造成治療困難的主

2、要原因。腫瘤轉(zhuǎn)移是多基因、多步驟、多階段相互作用的級(jí)聯(lián)反應(yīng)；在此過(guò)程中，腫瘤新生血管形成是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是腫瘤新生血管發(fā)生過(guò)程中的主要正性調(diào)控因子。
　　VEGF是一種具有高生物活性的功能性糖蛋白，具有很強(qiáng)的促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂繁殖以及增強(qiáng)毛細(xì)血管通透性的能力，通過(guò)與其相應(yīng)受體（VEGFR）結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)功能。已證實(shí)卵巢癌組織的發(fā)

3、生發(fā)展（生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等）依賴于癌組織中新生血管的形成。目前認(rèn)為，VEGFA是主要介導(dǎo)血管生成和血管發(fā)生的異構(gòu)體，且VEGFA的促血管生成作用是通過(guò)與 VEGFR2結(jié)合,引發(fā)一系列的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通道而實(shí)現(xiàn)的。位于VEGFA、VEGFR2基因上的遺傳多態(tài)性可能會(huì)通過(guò)改變其所編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)，進(jìn)而對(duì)患者臨床預(yù)后產(chǎn)生影響。
　　本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖茄芯?VEGFA和 VEGFR2基因的遺傳多態(tài)性與上皮性卵巢癌患者的臨床預(yù)后的關(guān)系。旨在尋找影響

4、上皮性卵巢癌患者臨床預(yù)后的遺傳分子標(biāo)志物，為臨床卵巢癌的“個(gè)體化”治療提供參考數(shù)據(jù)，進(jìn)而改進(jìn)卵巢癌的治療手段，提高其生存率。
　　方法：采用病例回顧性研究的方法，選取的病例為2001年12月至2011年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院婦科進(jìn)行手術(shù)治療的287例上皮性卵巢癌患者。術(shù)前采集入選病人5ml外周靜脈血，用蛋白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取基因組 DNA，用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-連接酶檢測(cè)反應(yīng)（PCR-LDR）的方法檢測(cè)上皮性卵巢癌患

5、者的 VEGFA基因 rs699947、rs833061、rs2010963和rs3025039以及VEGFR2基因rs1870377、rs2305948和rs2071559這7個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型和等位基因型的分布情況。所有入選患者均進(jìn)行了3年隨訪，部分患者經(jīng)過(guò)5年隨訪。評(píng)價(jià)患者臨床預(yù)后的指標(biāo)有總生存時(shí)間（ overall survival， OS）和無(wú)疾病進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）。

6、r>　　所有數(shù)據(jù)輸入Excel電子表格，建立數(shù)據(jù)庫(kù)。數(shù)據(jù)分析采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。用χ2檢驗(yàn)檢測(cè)各個(gè)基因型的頻率分布情況以及臨床相關(guān)因素指標(biāo)（患者年齡、組織的分化程度、病理類型、臨床分期、殘余病灶的大?。┡c預(yù)后的關(guān)系。采用 Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，各因素水平間比較用Log-rank及Breslow分析的方法；用Cox regression模型方法計(jì)算相對(duì)危險(xiǎn)度的比值比（Hazard ratio，HR）及其

7、95%可信區(qū)間（confidence interval，CI），并進(jìn)一步的分析影響預(yù)后的相關(guān)因素（患者年齡、組織的分化程度、病理類型、臨床分期、殘余病灶的大?。┛紤]在內(nèi)的多因素的相互作用。P＜0.05作為有顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1.VEGFA基因的 rs699947、rs833061、rs2010963和 rs3025039及VEGFR2基因的 rs1870377、rs2305948和rs2071559這七個(gè)S

8、NP的基因型頻率分布在上皮性卵巢人群中均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05）。
　　2.VEGFA基因 rs699947與EOC患者臨床預(yù)后的關(guān)系：患者按復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組分類進(jìn)行分析，在3年的隨訪時(shí)間中C/C、A/C、A/A在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組的分布頻率分別為56.3%、37.6%、6.1%和62.2%、34.0%、3.8%，在5年的隨訪時(shí)間中分別為56.6%、36.6%、6.8%和75.0%、25.0%、0%；經(jīng)

9、Kaplan-Meier單因素分析兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而Cox比例回歸多因素分析亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異（P>0.05）；按存活組和死亡組分類，在3年的隨訪時(shí)間中頻率分布為60.1%、35.0%、4.9%和56.5%、37.9%、5.6%，在5年的隨訪時(shí)間中為71.8%、26.6%、1.6%和54.7%、38.0%、7.3%，Kaplan-Meier單因素分析和 Cox比例回歸多因素分析顯示均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異（P>0.05）

10、。
　　3.VEGFA基因 rs833061與EOC患者臨床預(yù)后的關(guān)系：患者按復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組分類進(jìn)行生存分析，在3年的隨訪時(shí)間中 T/T、C/T、C/C在這兩組的分布頻率為56.9%、37.0%、6.1%和62.2%、34.0%、3.8%，在5年的隨訪時(shí)間中為57.8%、35.4%、6.8%和75.0%、25.0%、0%，經(jīng)Kaplan-Meier單因素分析兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異（P>0.05），Cox比例回歸多因素分析亦無(wú)統(tǒng)

11、計(jì)學(xué)上的差異（P>0.05）；按存活組和死亡組分類，三種基因型在3年的隨訪時(shí)間中分布為60.1%、35.0%、4.9%和57.3%、37.1%、5.6%，在5年的隨訪時(shí)間中為71.8%、26.6%、1.6%和56.2%、36.5%、7.3%，Kaplan-Meier單因素分析和 Cox比例回歸多因素分析顯示均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異（P>0.05）。
　　4.VEGFA基因 rs2010963與EOC患者臨床預(yù)后的關(guān)系：患者按復(fù)發(fā)組和未復(fù)

12、發(fā)組分類進(jìn)行分析，在3年的隨訪時(shí)間中G/G、C/G、C/C在這兩組的分布為39.8%、42.5%、17.7%和34.0%、48.1%、17.9%；在5年的隨訪時(shí)間中為35.4%、44.1%、20.5%和22.5%、57.5%、20.0%，經(jīng)Kaplan-Meier單因素分析兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），Cox比例回歸多因素分析亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；按存活組和死亡組分類，在3年的隨訪時(shí)間中三種基因型頻率分布分別為36.2

13、%、44.2%、19.6%和39.5%、45.2%、15.3%，在5年的隨訪時(shí)間中為29.7%、48.4%、21.9%和34.3%、46.0%、19.7%，Kaplan-Meier單因素分析和Cox比例回歸多因素分析顯示均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　5.VEGFA基因 rs3025039與EOC患者臨床預(yù)后的關(guān)系：患者按復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組分類進(jìn)行分析，在3年的隨訪時(shí)間中 C/C、C/T、T/T在這兩組的分布頻率為69.6%、

14、27.1%、3.3%和69.8%、30.2%、0%，在5年的隨訪時(shí)間中為70.8%、26.7%、2.5%和72.5%、27.5%、0%，經(jīng)Kaplan-Meier單因素分析，兩組比較無(wú)差異（P>0.05），進(jìn)一步的 Cox比例回歸多因素分析亦無(wú)差異（P>0.05）；按存活組和死亡組分類，在3年的隨訪時(shí)間中三種基因型頻率分布分別為69.4%、29.4%、1.2%和70.2%、26.6%、3.2%，在5年的隨訪時(shí)間中為71.8%、26.6%

15、、1.6%和70.8%、27.0%、2.2%， Kaplan-Meier單因素分析和 Cox比例回歸多因素分析顯示均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　6.VEGFR2基因 rs1870377與EOC患者臨床預(yù)后的關(guān)系：患者按復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組分類進(jìn)行分析，在3年的隨訪時(shí)間中T/T、A/T、A/A在這兩組的分布頻率為29.8%、50.3%、19.9%和33.0%、49.1%、17.9%，在5年的隨訪時(shí)間中為27.4%、54.0%、1

16、8.6%和37.5%、40.0%、22.5%，經(jīng)Kaplan-Meier單因素分析，兩組比較無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），Cox比例回歸多因素分析亦無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；以存活組和死亡組分類，在3年的隨訪時(shí)間中三種基因型頻率分布分別為27.4%、54.0%、18.6%和37.5%、40.0%、22.5%，在5年的隨訪時(shí)間中為32.8%、43.8%、23.4%和27.8%、54.7%、17.5%，Kaplan-Meier單

17、因素分析和Cox比例回歸多因素分析顯示均無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　7.VEGFR2基因 rs2305948與EOC患者臨床預(yù)后的關(guān)系：患者按復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組分類進(jìn)行分析，在3年的隨訪時(shí)間中C/C、C/T、T/T的分布頻率為78.4%、21.0%、0.6%和72.6%、27.4%、0%，在5年的隨訪時(shí)間中為77.0%、22.4%、0.6%和72.5%、27.5%、0%，經(jīng)Kaplan-Meier單因素分析，兩組比較無(wú)統(tǒng)

18、計(jì)學(xué)意義（P>0.05），Cox比例回歸多因素分析亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；按存活組和死亡組分類，在3年的隨訪時(shí)間中三種基因型頻率分布分別為76.1%、23.9%、0%和76.6%、22.6%、0.8%，在5年的隨訪時(shí)間中為79.7%、20.3%、0%和74.5%、24.8%、0.7%， Kaplan-Meier單因素分析和Cox比例回歸多因素分析顯示均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　8.VEGFR2基因 rs20715

19、59與EOC患者臨床預(yù)后的關(guān)系：患者按復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組分類進(jìn)行生存分析，在3年的隨訪時(shí)間中T/T、C/T、C/C的分布頻率為41.4%、46.4%、12.2%和39.7%、50.9%、9.4%，在5年的隨訪時(shí)間中為43.5%、47.2%、9.3%和32.5%、57.5%、10.0%，經(jīng)Kaplan-Meier單因素分析，兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），Cox比例回歸多因素分析亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；按存活組和死亡組分類，在

20、3年的隨訪時(shí)間中三種基因型分布分別為39.3%、52.7%、8.0%和42.8%、41.9%、15.3%，在5年的隨訪時(shí)間中為37.5%、53.1%、9.4%和43.1%、47.4%、9.5%， Kaplan-Meier單因素分析和Cox比例回歸多因素分析顯示均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.VEGFA基因的 rs699947、rs833061、rs2010963和rs3025039遺傳多態(tài)性可能與中國(guó)北