PD-1基因多態(tài)性與上皮性卵巢癌患者發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及臨床預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、目的：卵巢癌是致死率最高的婦科惡性腫瘤，最常見的組織學(xué)類型為上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer, EOC)。目前治療原則是以手術(shù)為主，化療為輔的綜合治療。由于早期EOC無典型臨床表現(xiàn)，臨床診斷缺乏有效的分子標(biāo)志物，所以70％卵巢癌確診時(shí)已為晚期。初始治療中僅有70%卵巢癌患者對鉑類化療藥敏感[1]，但治療后仍有2/3的患者3年內(nèi)復(fù)發(fā)，故EOC患者預(yù)后很差，5年生存率僅為20%~40%[2]。因此尋找有效EO

2、C篩查的分子標(biāo)志物和治療新策略成為現(xiàn)今研究的重點(diǎn)。目前較多證據(jù)證明卵巢癌具有免疫原性[3]，卵巢癌的免疫診斷及治療受到了廣泛關(guān)注。PD-1(programmed death1)程序性死亡受體1是一種重要的免疫抑制因子，PD-L1是其主要配體，二者結(jié)合后抑制T細(xì)胞活性，從而抑制免疫反應(yīng)的發(fā)生[4]，介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸。有關(guān) PD-1基因與腫瘤發(fā)生及預(yù)后的關(guān)系己經(jīng)成為腫瘤研究的熱點(diǎn)之一。本研究旨在探討PD-1基因單核苷酸多態(tài)性（SNPs）與E

3、OC患者發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及臨床預(yù)后的關(guān)系。
　　方法：1)標(biāo)本采集:收集620例經(jīng)手術(shù)后病理證實(shí)的EOC患者和620例健康對照組婦女的外周靜脈血5ml，抗凝處理后4℃保存，并記錄其相關(guān)病史資料。采用蛋白酶 K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取血液標(biāo)本中的DNA。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-連接酶檢測反應(yīng)（ polymerase chain reaction-ligase detection reaction，PCR-LDR）對所采集的研究對象外周血DNA的

4、PD-1基因 rs36084323(PD-1.1)和rs2227981(PD-1.5)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行基因型檢測。2) PD-1基因SNPs位點(diǎn)與EOC發(fā)病關(guān)系的研究（病例-對照研究）：620例EOC患者作為病例組，620例健康婦女作為對照組。分析兩組之間PD-1.1、PD-1.5位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布差異。3) PD-1基因SNPs位點(diǎn)與EOC臨床預(yù)后關(guān)系的研究（隊(duì)列研究）:620例患者中有258患者具有3年以上隨訪資料，163患者

5、有5年以上隨訪資料。隨訪包括：評價(jià)復(fù)發(fā)的指標(biāo)為無疾病進(jìn)展生存時(shí)間（Progression-Free Survival， PFS），和總生存時(shí)間（Overall Survival，OS）。分析2個(gè)SNPs與EOC患者臨床預(yù)后的關(guān)系。4)統(tǒng)計(jì)：運(yùn)用SPSS22.0版軟件包（SPSS Company， Chicago，Illinois，USA）進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析?；蛐皖l率的預(yù)期值與觀察值進(jìn)行Hardy-Weinberg（H-W）平衡分析并采用

6、χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較?；蛐皖l率和等位基因頻率在病例組和對照組分布采用行×列表的χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較。運(yùn)用非條件Logistic回歸模型的方法計(jì)算出相對風(fēng)險(xiǎn)度比值比（odds ratio，OR）及其95%可信區(qū)間（confidence interval，CI）。PD-1.1與PD-1.5單體型（haplotype）頻率在病例組和對照組分布采用單體型分析法進(jìn)行比較。生存分析采用Kaplan-Meier法，各因素水平間比較用Log-rank分析，

7、Cox回歸模型進(jìn)一步分析預(yù)后相關(guān)因素（患者年齡、臨床分期、腫瘤分化程度、病理類型、初次手術(shù)后殘存灶大?。?。以P<0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：1 PD-1.1多態(tài)的 A/A、A/G、G/G三種基因型頻率在卵巢癌組為27.3%，48.6%，24.2%，在對照組為20.8%，52.1%，27.1%，兩組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.028）。與A/A基因型比較，攜帶A/G基因型或G/G基因型均顯著降低婦女卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

8、（OR=0.71，95%CI=0.54-0.94;OR=0.68，95%CI=0.50-0.94）。等位基因A和G在卵巢癌組及對照組中分布頻率分別為51.3%、48.7%和46.9%、53.2%，兩組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.02），與等位基因A比較，G基因的攜帶者卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯降低（OR=0.83，95%CI=0.71-0.97）；2 PD-1.5多態(tài)的 C/C、C/T、T/T三種基因型頻率在卵巢癌組為56.6%，37.6%，5

9、.8%，在對照組為51.5%，40.3%，8.2%，兩組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.096）。C/C、C/T+T/T基因型在卵巢癌組所占比例分別為56.6%、43.4%，在對照組所占比例分別為51.5%、48.5%，兩組相比統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不明顯（P=0.064）。等位基因C和T在卵巢癌組及對照組中分布頻率分別為75.4%、24.6%和71.6%、28.4%，兩組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.033），與等位基因C比較，T基因攜帶者卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

10、降低（OR=0.82，95%CI=0.69-0.98）；3 PD-1.1與PD-1.5單體型AC、AT、GC、GT頻率在病例組分別為51.2%，0.3%，24.2%，24.3%，在對照組為46%，0.9%，25.6%，27.5%，兩組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.023），與單體型AC比較，攜帶GT單體型可降低婦女卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR=0.79，95%CI=0.65-0.96）；4 PD-1.1多態(tài)的A/A、A/G、G/G3種基因型的患者3

11、年中位無疾病進(jìn)展生存時(shí)間（progression-free survival,PFS）分別為12、22、13個(gè)月，中位總生存時(shí)間（overall survival，OS）分別為29、36、36個(gè)月，5年中位無疾病進(jìn)展生存時(shí)間（PFS）分別為13、12、12個(gè)月，中位總生存時(shí)間（OS）分別為38、33、52個(gè)月。經(jīng)Kaplan-Meier單因素分析，基因型頻率分布與EOC患者的3年、5年P(guān)FS和OS無關(guān)。經(jīng)Cox回歸多因素分析顯示（用年齡

12、、臨床分期、初次手術(shù)殘余灶大小校正基因型頻率分布），PD-1.1（rs36084323）A/A、A/G、G/G基因型頻率分布與患者的3年、5年復(fù)發(fā)率和死亡率無關(guān)；5 PD-1.5位點(diǎn)攜帶 C/C、C/T+T/T兩種基因型的患者3年中位無疾病進(jìn)展生存時(shí)間（PFS）分別為15、16個(gè)月，中位總生存時(shí)間（OS）分別為36、36個(gè)月，5年中位無疾病進(jìn)展生存時(shí)間（PFS）分別為12、12個(gè)月，中位總生存時(shí)間（OS）分別為36、44個(gè)月。經(jīng) Kap

13、lan-Meier單因素分析，基因型頻率分布與EOC患者的3年、5年P(guān)FS和OS無關(guān)。經(jīng)Cox回歸多因素分析顯示（用年齡、臨床分期、初次手術(shù)殘余灶大小校正基因型頻率分布），PD-1.5（rs2227981）C/C、C/T+T/T基因型頻率分布與患者的3年、5年復(fù)發(fā)率和死亡率無關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.PD-1.1（rs36084323）多態(tài)位點(diǎn)可能與EOC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，G基因攜帶者可能明顯降低EOC的患病風(fēng)險(xiǎn)。
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