MMP-2和TIMP-2基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性與卵巢上皮性癌關(guān)系的研究.pdf

1、目的：卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤，由于發(fā)病隱匿，進(jìn)展迅速，缺乏有效的早期診斷方法，70％～80％的患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已為晚期，5年生存率仍徘徊在25％～30％。目前卵巢癌的病因尚不清楚，但研究發(fā)現(xiàn)，約10％的卵巢惡性腫瘤患者具有遺傳異常，因此，尋找易感基因，確立高危人群，實(shí)現(xiàn)早期診斷是提高卵巢癌生存率的有效途徑?；|(zhì)金屬蛋白酶因其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的重要作用，已被作為一組重要的遺傳候選基因，近年來成為研究的熱點(diǎn)。 基質(zhì)金屬蛋白酶(matr

2、ix metalloproteinases，MMPs)是降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的一類重要的Zn2+依賴性蛋白水解酶，組織金屬蛋白酶抑制劑(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)是其天然抑制物，二者的表達(dá)失衡在腫瘤發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移過程中起著十分重要的作用。其中明膠酶MMP-2和其特異性抑制因子TIMP-2與腫瘤的關(guān)系倍受關(guān)注。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)在MMP-2和TIMP-2基因啟動(dòng)子區(qū)有一

3、些多態(tài)性位點(diǎn)，可以影響基因的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白質(zhì)表達(dá)，進(jìn)而與某些腫瘤的發(fā)病相關(guān)。本研究旨在探討MMP-2和TIMP-2基因啟動(dòng)子區(qū)單核苷酸多態(tài)性(SNPs)與卵巢上皮性癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，從分子水平為卵巢癌的預(yù)防和診治提供依據(jù)。 方法：采用基于醫(yī)院的病例-對照研究方法，以246例卵巢癌患者和324例健康對照婦女為研究對象，采集外周靜脈血5ml，以蛋白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取基因組DNA，聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(pol

4、ymerasechain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)方法對MMP-2基因啟動(dòng)子區(qū)C-1306T、C-735T和TIMP-2基因啟動(dòng)子區(qū)G-418C 3個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS11.5版軟件包(SPSS Company,Chicago，Illinois，USA)進(jìn)行處理。正常對照組基因型頻率分布行x2檢驗(yàn)做Hardy-w

5、einberg平衡分析。病例組與對照組的年齡、初潮年齡差異采用t檢驗(yàn)，孕次、產(chǎn)次差異比較采用x2檢驗(yàn)。基因型和等位基因頻率分布比較采用x2檢驗(yàn)，以非條件logistic回歸方法計(jì)算表示相對風(fēng)險(xiǎn)度的比值比(oddsratio，OR)及其95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)。采用EH軟件分析MMP-2 C-1306T和C-735T基因單體型頻率，21d軟件分析連鎖不平衡狀態(tài)。采用似然比檢驗(yàn)(1ikelihoodra

6、tio test)分析MMP-2和TIMP-2基因之間的交互作用。P＜0.05作為差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果: 1.對照組MMP-2 C-1306T、C-735T SNPs位點(diǎn)和TIMP-2G-418C SNP位點(diǎn)的基因型頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P=0.87，P=0.75和P=0.81)。 2.MMP-2 C-1306T多態(tài)的基因型和等位基因頻率在卵巢癌組和對照組中分布無顯著性差異(P=0

7、.42和P=0.55)。與T/T+C/T基因型比較，C/C基因型可能與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)，OR值為1.07(95％CI=0.72～1.58)。以病理類型、臨床分期或確診時(shí)年齡分層分析，MMP-2 C-1306T多態(tài)的基因型頻率在各組問分布也均未發(fā)現(xiàn)顯著性差異(P值均大于0.05)。 3.MMP-2 C-735T多態(tài)3種基因型頻率(C/C、C/T、T/T)在卵巢癌組和對照組中分別是66，7％、28.0％、5.3％和55.9％、3

8、9.2％、4.9％，兩組比較有顯著性差異(P=0.02)；卵巢癌組的C等位基因頻率(80.7％)明顯高于對照組(75.5％)，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.04)。與T/T+C/T基因型比較，攜帶C/C基因型可顯著增加卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，OR值為1.58(95％CI=1.12～2.23)。以病理類型分層分析發(fā)現(xiàn)，C/C基因型與宮內(nèi)膜樣癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯相關(guān)(OR=1.69，95％CI=1.03～2.79)，且有增加漿液性癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的趨勢(O

9、R=I.58，95％CI=0.97～2.56)；以臨床分期分層分析顯示，C/C基因型與早期卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯相關(guān)(OR=1.88，95％CI=1.11～3.17)，有增加晚期卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的趨勢(OR=1.46，95％CI=0.99～2.15)：以年齡分層分析顯示，攜帶C/C基因型明顯增加年齡≥50歲婦女患卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)，OR值為1.71(95％CI=1.14～2.57)。 4 TIMP-2 G-418C多態(tài)的基因型和等位基因頻

10、率在卵巢癌組與對照組中分布無顯著性差異(P=0.47和P=0.33)，與C/C+G/C基因型相比，G/G基因型可能與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)(OR=1.13，95％CI=0.80～1.62)。但進(jìn)一步分層分析發(fā)現(xiàn)，攜帶G/G基因型有增加宮內(nèi)膜樣癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的趨勢，OR值為1.62(95％CI=0.94～2.78)，而與臨床分期及發(fā)病年齡無顯著關(guān)聯(lián)。 5 對MMP-2 C-1306T和C-735T兩位點(diǎn)SNPs進(jìn)行聯(lián)合分析顯示，C-13

11、06-C-735單體型正常對照組中最常見的，占65.7％，但4種單體型(T-1306-T-735、T-1306-C-735、C-1306-T-735和C-1306-C-735)頻率在卵巢癌組與對照組中分布無顯著性差異(P=0.24)。另外發(fā)現(xiàn)，MMP-2-1306C等位基因和-735C等位基因存在連鎖不平衡現(xiàn)象(D'=0.78，P=0.00)。 6 采用似然比檢驗(yàn)分析TIMP-2 G-418C SNP與MMP-2C-1306T、

12、C-735T 2個(gè)SNPs之間的基因-基因交互作用。結(jié)果顯示，TIMP-2 G-418C與MMP-2 C-1306T或TIMP-2 G-418C與MMP-2 C-735T之間無明顯交互作用存在(P=0.74和P=0.41)。但對不同基因型組合分析顯示，卵巢癌組的C/CMMP-2 C-735T-G/GTIMP-2G-418C頻率(46.3％)明顯高于對照組(36.4％)，差異有顯著性(P=0.02)，且攜帶C/CMMP-2 C-735T-

13、G/GTIMP-2 G-418c基因型個(gè)體的卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)是攜帶C/T+T/TMMP-2 c-735T-G/G TIMP-2 G-418C基因型的1.67倍(95％CI=1.10～2.54)。 結(jié)論: 1.MMP-2 C-1306T的基因多態(tài)性可能與上皮性卵巢癌遺傳易感性無關(guān)。 2攜帶MMP-2-735C/C基因型可能顯著增加卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并與卵巢癌的病理類型、臨床分期及年齡有顯著關(guān)聯(lián)，因此，該基因型可能為卵

14、巢上皮性癌發(fā)病的潛在危險(xiǎn)因素。 3.MMP-2 C-1306T和C-735T多態(tài)間存在連鎖不平衡現(xiàn)象，但4種單體型與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無顯著關(guān)聯(lián)。 4TIMP-2 G-418C單核苷酸多態(tài)性可能與不同病理類型的卵巢上皮性癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。 5 TIMP-2 G-418C SNP與MMP-2 C-1306T、C.735T 2個(gè)SNPs之間，雖然未發(fā)現(xiàn)有明顯交互作用存在，但同時(shí)攜帶具有強(qiáng)啟動(dòng)子活性的MMP-2-735C/