β-catenin蛋白敲除抗肺上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、目的:通過在肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染β-catenin蛋白敲除載體(SCF～(β-TrCP)-Ecad),來觀察β-catenin蛋白敲除對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響作用,進(jìn)一步探討β-catenin信號(hào)通路在TGF-β1致上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)中的作用及β-catenin蛋白敲除對(duì)EMT的治療作用。
　　 方法:在體外培養(yǎng)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(RLE-6TN),分別采用空質(zhì)粒(pcDNA3)、β-c

2、atenin蛋白敲除載體(SCF～(β-TrCP)-Ecad)轉(zhuǎn)染RLE-6TN后,TGF-β1(5ng/mL)干預(yù)24 h,分為正常對(duì)照組(A組)、RLE-6TN加TGF-β1組(B組)、pcDNA3轉(zhuǎn)染加TGF-β1組(C組)、SCF～(β-TrCP)-Ecad轉(zhuǎn)染加TGF-β1組(D組),采用Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞E-鈣粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和纖維連接蛋白(Fn)的表達(dá);采用

3、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)β-catenin途徑下游轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Snail表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞E-cadherin、α-SMA、Fn蛋白水平:與A組比較,B組、C組其α-SMA、Fn蛋白表達(dá)顯著升高, E-cadherin表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);B組與C組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,與B組、C組比較,D組其α-SMA、Fn蛋白表達(dá)顯著降低,而E-cadherin表達(dá)

4、顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);A組與D組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2、各組細(xì)胞β-catenin途徑下游轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Snail表達(dá)的實(shí)時(shí)定量PCR()結(jié)果:與A組比較,B組、C組其β-catenin途徑下游轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Snail表達(dá)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);B組與C組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,與B組、C組比較,D組其β-catenin途徑下游轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Snail表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);A組與