A1CF抑制大鼠腎臟近曲小管上皮細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化及其遷移能力.pdf

1、目的:
　　探討Apobec-1互補(bǔ)因子(A1CF)在C57BL/6小鼠腎臟中的表達(dá)，以及A1CF對(duì)腎小管上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）過(guò)程的影響，初步闡明A1CF在哺乳動(dòng)物腎臟中可能的生物學(xué)功能。
　　方法:
　　1.利用整胚原位雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A1CF在C57BL/6小鼠腎臟發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)情況；利用切片原位雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A1CF在成年C57BL/6小

2、鼠腎臟中的具體表達(dá)部位。
　　2.在大鼠腎臟近曲小管上皮細(xì)胞NRK52e中過(guò)表達(dá)A1CF，利用western-blot及免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)該細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中相關(guān)標(biāo)志蛋白的變化；利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)定該細(xì)胞遷移能力的改變。
　　3.采用人工合成的A1CF-rat-siRNA敲低NRK52e細(xì)胞內(nèi)源性A1CF表達(dá)，利用western-blot及免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)該細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中相關(guān)標(biāo)志蛋白的變化；利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

3、測(cè)定該細(xì)胞遷移能力的改變。
　　結(jié)果:
　　1.原位雜交結(jié)果顯示A1CF在C57BL/6小鼠腎臟發(fā)育早期不表達(dá)，自胚胎期15.5天開始表達(dá)，并且在成年腎臟中集中表達(dá)在腎小管中。
　　2.在大鼠腎臟近曲小管上皮細(xì)胞NRK52e中過(guò)表達(dá)A1CF抑制了該細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程及細(xì)胞遷移能力，A1CF的兩種剪切變體(A1CF/A1CF(-8AA))在上述過(guò)程中具有相似的作用。
　　3.利用A1CF的siRNA敲低NRK