Twist1及Twist1-AS在骨肉瘤組織及細(xì)胞中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　Twist1是一類轉(zhuǎn)錄因子，Twist1-AS屬于lncRNA，兩者可通過(guò)互補(bǔ)配對(duì)形成雙鏈RNA(dsRNA)，這兩者在多個(gè)腫瘤病理過(guò)程中起到了調(diào)控作用，然而在骨肉瘤發(fā)病過(guò)程中的作用尚不明確，本文主要通過(guò)測(cè)定Twist1及Twist1-AS分別在骨肉瘤細(xì)胞系，骨肉瘤組織，瘤旁組織及正常組織中的表達(dá)情況，試評(píng)估兩者在骨肉瘤發(fā)病過(guò)程中的相關(guān)性并為后續(xù)研究其機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.應(yīng)用RT-PCR

2、檢測(cè)7名骨肉瘤患者標(biāo)本（含骨肉瘤瘤體組織，瘤旁組織及正常切緣組織）中Twist1及Twist1-AS的表達(dá)情況，采用SPSS19.0對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探討兩個(gè)基因在瘤體組織，瘤旁組織與正常組織之間的表達(dá)差異。
　　2.應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞系MG-63，U2-OS及人成骨細(xì)胞hFOB1.19中Twist1及Twist1-AS的表達(dá)情況，采用SPSS19.0對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，研究?jī)烧咴诠侨饬鲋械谋磉_(dá)差異。
　　

3、結(jié)果:
　　1.Twist1在7例骨肉瘤瘤體組織中表達(dá)量高于正常切緣組織(P＜0.05)，7例瘤旁組織（距離瘤體2cm的組織）中Twist1的表達(dá)水平與正常切緣組織的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，7例瘤旁組織（距離瘤體2cm的組織）中Twist1的表達(dá)水平與腫瘤組織的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)
　　2.Twist1-AS在7例骨肉瘤瘤體組織中表達(dá)量高于正常切緣組織(P＜0.05)，7例瘤旁組織（距離瘤體2cm的組織

4、）中Twist1-AS的表達(dá)水平與正常切緣組織的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，7例瘤旁組織（距離瘤體2cm的組織）中Twist1-AS的表達(dá)水平與腫瘤組織的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.MG-63和U2-OS中Twist1的表達(dá)量與hFOB1.19的差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.MG-63和U2-OS中Twist1-AS的表達(dá)量較hFOB1.19高(P＜0.05)。
　　5.使用隨機(jī)

5、引物進(jìn)行Twist1-AS逆轉(zhuǎn)錄將導(dǎo)致RT-PCR無(wú)法得到Ct值。
　　結(jié)論:
　　1.本實(shí)驗(yàn)明確了Twist1/Twist1-AS這對(duì)基因在骨肉瘤組織中表達(dá)水平較正常組織有所升高，驗(yàn)證了本課題組前期研究基因芯片結(jié)果，并為后續(xù)探索其作用機(jī)制提供了理論依據(jù)和基因儲(chǔ)備。
　　2.Twist1-AS在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)量顯著高于hFOB1.19。
　　3.通過(guò)RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)AS這類反義轉(zhuǎn)錄物時(shí)，必須進(jìn)行特異性逆轉(zhuǎn)錄