大黃魚(yú)(Pseudosciaena crocea)細(xì)胞色素P450 CYP4F7基因的克隆鑒定及其在病原疫苗和LPS刺激下組織表達(dá)特性研究.pdf

1、大黃魚(yú)((Pseudosciaena crocea)是我國(guó)海水傳統(tǒng)養(yǎng)殖中最重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚(yú)類之一。細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450)是細(xì)胞色素P450單加氧酶系的最重要組分之一,參與催化生物對(duì)內(nèi)源物質(zhì)和親脂性外源化合物的代謝過(guò)程。
　　 本研究是在本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的大黃魚(yú)消減雜交cDNA文庫(kù)中長(zhǎng)623 bp的EST序列基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)引物,以腹腔注射LPS的大黃魚(yú)肝臟mRNA為模板,采用RACE-PCR.的方法,克隆、鑒定

2、出細(xì)胞色素P450 CYP4F7基因cDNA全長(zhǎng)序列。結(jié)果顯示:大黃魚(yú)CYP4F7cDNA全長(zhǎng)1934bp,5'端非編碼區(qū)59 bp,3'端非編碼區(qū)264 bp,開(kāi)放式閱讀框1611 bp,編碼含有536個(gè)氨基酸殘基的蛋白,推測(cè)的蛋白質(zhì)分子量為61.6 Kda。序列分析表明大黃魚(yú)的CYP4F7的氨基酸序列與舌齒鱸的同源性最高,達(dá)91％;與人CYP4F2的同源性為68％,與小鼠CYP4F4和家鼠CYP4F6分別為71％和67％。
　

3、　 采用RT-PCR方法研究了CYP4F7基因在對(duì)照組大黃魚(yú)、注射了溶藻弧菌滅活疫苗組大黃魚(yú)和注射了細(xì)菌脂多糖LPS(Lipopolysaccharide)的大黃魚(yú)各組織中的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn):CYP4F7在各處理組大黃魚(yú)的脾、肝、心、頭腎、腎、鰓中均有表達(dá),脾、肝組織中的表達(dá)水平高于頭腎、心、腎和鰓。在對(duì)照組和溶藻弧菌滅活疫苗組大黃魚(yú)的肌肉和腸組織中CYP4F7均有少量表達(dá),而在LPS刺激組中未見(jiàn)表達(dá)。CYP4F7在LPS刺激組中的

4、表達(dá)量均顯著低于對(duì)照組,而溶藻弧菌滅活疫苗組刺激組則明顯高于對(duì)照組。采用RQ-PCR相對(duì)定量方法分析該基因在對(duì)照組和溶藻弧菌滅活疫苗刺激組織中的表達(dá)情況,所得結(jié)果同RT-PCR一致。
　　 上述結(jié)果說(shuō)明:我們已經(jīng)首次成功克隆鑒定了大黃魚(yú)細(xì)胞色素P450CYP4F7基因。溶藻弧菌滅活疫苗的刺激增強(qiáng)了CYP4F7在大黃魚(yú)各組織中的表達(dá);而CYP4F7在注射了LPS的大黃魚(yú)各組織中的表達(dá)量均低于正常的大黃魚(yú)各組織中CYP4F7的表達(dá)量