白鰱細(xì)胞色素P450(CYP3A137)的克隆及其表達研究.pdf

1、細(xì)胞色素P450是一類含有亞鐵血紅素的超家族單加氧酶，它參與許多外源物質(zhì)（包括藥物、環(huán)境化合物等）和內(nèi)源性物質(zhì)（如激素）的代謝轉(zhuǎn)化。CYP3A是Ⅰ相解毒酶系CYP450家族中的重要成員，在肝臟對外源毒物解毒和內(nèi)源激素的代謝過程中發(fā)揮重要作用。本研究克隆了白鰱肝臟CYP3A137基因，并檢測了利福平、毒死蜱和離子液體對其表達的影響。
　　 本研究中克隆了白鰱CYP3A137 cDNA全序列，構(gòu)建了CYP3A系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明，白

2、鰱CYP3A137氨基酸序列與其它魚的CYP3A序列高度相似。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，白鰱CYP3A137 cDNA序列全長1810 bp，開放閱讀框1539 bp，編碼513個氨基酸。CYP3A137蛋白質(zhì)分子量為58.7995 ku，理論等電點為7.96。該蛋白是一個穩(wěn)定蛋白并具有一定的親水性。二級結(jié)構(gòu)預(yù)測可知，CYP3A137包含45.22％的a-螺旋、12.28％的延伸鏈，4.29％β-折疊和38.21％的無規(guī)則卷曲。具有2個顯

3、著的跨膜結(jié)合區(qū)。
　　 組織學(xué)分布檢測結(jié)果顯示，CYP3A137基因在白鰱的肝臟、腎臟、脾臟、腦、心臟、小腸、肌肉都有表達，表達量高低依次為肝臟＞小腸＞腎臟＞脾臟>腦＞心臟＞肌肉。
　　 利福平對白鰱的毒性結(jié)果表明，以50 mg·Kg-1和200 mg·Kg-1利福平腹腔注射白鰱，均能誘導(dǎo)白鰱肝臟CYP3A137基因表達，且通過紅霉素-N-脫甲基法檢測50mg·Kg-1處理組在24h即能使CYP3A酶活性升高，200 m

4、g·Kg-1處理組在72 h時CYP3A酶活性極顯著高于對照組。結(jié)果表明，利福平能誘導(dǎo)白鰱肝臟CYP3A137表達。
　　 毒死蜱對白鰱的急性毒性結(jié)果表明，毒死蜱對白鰱屬于高毒，96 h LC50為0.172mg·L-1。根據(jù)半致死劑量選取0.017 mg·L-1(111096 h LC50)和0.103 mg·L-1(3/596 hLC50)濃度組毒死蜱暴露白鰱，24h后取肝胰臟，提取RNA，通過熒光定量PCR檢測CYP3A1

5、37基因的表達情況，結(jié)果表明毒死蜱對白鰱的CYP3A137基因表達有明顯抑制作用。
　　 離子液體[C8mim]Br對白鰱的急性毒性結(jié)果表明，離子液體對白鰱屬于低毒，72 hLC50為218.52 mg·L-1。根據(jù)半致死劑量選取22 mg·L-1(1/10 LC50)和109 mg·L-1(1/2 LC50)濃度組[C8mim]Br對白鰱染毒，24 h、72 h取肝胰臟，提取RNA，通過熒光定量PCR檢測CYP3A137基因的