深海霉菌次級代謝產(chǎn)物的肝癌細(xì)胞毒活性分析及機(jī)制初探.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)室前期分離得到一株深海來源曲霉（Aspergillus sp.）,本實(shí)驗(yàn)的目的是提取分離純化鑒定其次級代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu),然后研究分離得到的新化
　　合物的肝癌細(xì)胞毒活性,并對其作用機(jī)理進(jìn)行初步研究，從而篩選出具有明顯抗腫瘤活性的化合物。
　　方法：通過小規(guī)模發(fā)酵，乙酸乙酯萃取次級代謝產(chǎn)物并運(yùn)用層析法對其進(jìn)行分離純化；利用質(zhì)譜、核磁共振等對純化的產(chǎn)物進(jìn)行鑒定；用CCK-8法檢測代謝產(chǎn)物對肝癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，雙向凝膠電

2、泳法測定相關(guān)蛋白表達(dá),對其細(xì)胞毒活性的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　結(jié)果：通過對曲霉（Aspergillus sp.）的次級代謝產(chǎn)物的分離純化，得到了四個單體化合物，并確定四種化合物分別為sterigmatocystine、
　　anhydroorcinol、1'-methoxy-averantin、averufine。其中化合物anhydroorcinol對肝癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性強(qiáng)，對于正常肝細(xì)胞的毒活性卻較低。通過對加藥組和

3、對照組的肝癌細(xì)胞株Bel7402和正常肝細(xì)胞株HL7702細(xì)胞的雙向電泳結(jié)果進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)HL7702幾乎找不到變化顯著的蛋白點(diǎn)，而在Bel7402中找到15個有顯著變化的蛋白點(diǎn)；又對HL7702和Bel7402進(jìn)行蛋白質(zhì)比較，以這15個有顯著變化的蛋白點(diǎn)為目標(biāo)，找到Bel7402與HL7702共同所有的蛋白點(diǎn)8個，其中用藥組肝癌細(xì)胞株Bel7402的2個蛋白點(diǎn)上調(diào)，6個蛋白點(diǎn)下調(diào)。將這8個蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF/TOF-MS質(zhì)譜

4、分析鑒定，共得到6個可信結(jié)果（p＜0.05），這六個蛋白點(diǎn)分別為KRT8、Keratin, typeⅠcytoskeletal19、Keratin, typeⅠ
　　cytoskeletal10、Alpha-enolase isoform1、 Glucose-6-phoaphate1-dehydrogenase isoform b，還有一個未知蛋白(protein for IMAGE:3534054)。
　　結(jié)論：1、從曲霉