硫化氫在P38MAPK信號通路對肝纖維化影響中的作用.pdf

1、目的：
　　觀察硫化氫供體硫氫化鈉及P38MAPK信號通路特異性抑制劑SB203580對肝纖維化大鼠肝組織形態(tài)學及膠原沉積的影響，探討硫化氫與P38MAPK信號通路的關系，進一步了解硫化氫對肝纖維化作用的分子機制。
　　方法：
　　采用40％四氯化碳棉籽油背部皮下注射聯(lián)合高脂肪高膽固醇飼料及酒精的復合因素法建立肝纖維化大鼠模型。肝纖維化模型大鼠于建模成功后分為5組：肝纖維化組(HF組)、DMSO溶劑對照組(D組)、硫氫

2、化鈉組(S組)、SB203580組(SB組)、SB203580+硫氫化鈉組(SB+S組)，分別腹腔注射生理鹽水、2‰DMSO溶液、SB203580溶液(0.3mg/kg·d)、硫氫化鈉溶液(56μmol/kg·d)、SB203580溶液+硫氫化鈉溶液(0.3mg/kg·d、56μmol/kg·d)進行干預，共4次。各組大鼠均于干預結束后次日處死并留取肝臟。經(jīng)HE染色觀察肝組織纖維化分期，Masson染色計算用于評估肝組織內(nèi)膠原沉積的SS

3、S評分，免疫組織化學染色觀察肝組織I、III型膠原蛋白的表達，RT-PCR法檢測肝組織內(nèi)I、III型膠原mRNA表達水平，Western blot法檢測肝組織內(nèi)P38MAPK、Caspase-3蛋白表達水平。
　　結果：
　　(1)HE染色見肝纖維模型組肝臟內(nèi)小葉結構紊亂，纖維結締組織增生、假小葉形成，肝細胞變性壞死及炎細胞浸潤明顯。(2) HE染色觀察肝纖維化分期，HF組、D組肝纖維分期較N組顯著升高，S組、SB組、SB+

4、S組肝纖維化分期分別較HF組、D組下降，SB組、S組間無明顯差異，SB+S組肝纖維化分期較SB組、S組下降。(3) Masson評價肝組織SSS評分，HF組、D組SSS評分較N組顯著升高，S組、SB組、SB+S組SSS評分分別較HF組、D組降低，SB+S組SSS評分比S組、SB組低，S組SSS評分較SB組無差異。(4)免疫組織化學染色及RT-PCR法檢測肝組織I、III型膠原蛋白及其mRNA的表達，HF組、D組I、III型膠原蛋白及其m

5、RNA表達較N組顯著增加，S組、SB組、SB+S組I、III型膠原蛋白及其mRNA分別較HF組、D組減少，SB+S組I、III型膠原蛋白及其mRNA表達比S組、SB組少，但S組I、III型膠原蛋白及其mRNA較SB組無差異。(5)Western-blot結果示： N組、HF組、D組、S組的P38MAPK蛋白表達無差異，SB組P38MAPK蛋白的表達較HF組減少，SB+S組P38MAPK蛋白表達較SB組增多；HF組caspase-3蛋白表