致病疫霉線粒體單倍型PCR檢測方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、本研究在對4個致病疫霉線粒體單倍型（Ⅰa，Ⅰb，Ⅱa和Ⅲb）基因組序列多態(tài)性系統(tǒng)分析和對已有的3種線粒體單倍型檢測方法系統(tǒng)分析的基礎(chǔ)上，提出并建立了以PCR為基礎(chǔ)的致病疫霉線粒體單倍型快速檢測的新方法。本研究通過分析致病疫霉線粒體多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)了致病疫霉線粒體基因組中由大片段插入/缺失引起的2個高變區(qū)即HVRi和HVRii，并將其確定為線粒體單倍型檢測方法的目標(biāo)區(qū)域。第一個高變區(qū)HVRi由長度為1885 bp的片段插入/缺失引起，該高變區(qū)

2、用于直接確定1990年Carter等人限制性內(nèi)切酶酶切發(fā)現(xiàn)的用于區(qū)分由線粒體基因組長度引起的不同線粒體類型，即typeⅠ和typeⅡ。而第二個高變區(qū)HVRii不同數(shù)目(n=1，2，3)由36 bp重復(fù)單元構(gòu)成。該區(qū)域擴增子長度多態(tài)性應(yīng)用于線粒體新類型的確定。綜合致病疫霉線粒體兩個高變區(qū)，將其單倍型劃分為6種類型即Ⅰ R1，ⅠR2，ⅠR3，Ⅱ R1，ⅡR2和ⅡR3。本研究以23株致病疫霉菌株為例，用PCR方法檢測出5種線粒體單倍型，未發(fā)現(xiàn)

3、Ⅱ R1型。同時，在被測的23株代表性菌株中也發(fā)現(xiàn)了6個typeⅠ型菌株的錯誤鑒定，它們是由于PCR-RFLP方法中P4產(chǎn)物第二個酶切位點識別序列中的堿基C突變?yōu)門而造成的。利用新建的PCR方法測定我國10個省、市、自治區(qū)共459株致病疫霉菌株的線粒體單倍型。其中，引起馬鈴薯晚疫病菌共計434株，共發(fā)現(xiàn)了5種線粒體單倍型，仍未發(fā)現(xiàn)Ⅱ R1;引起番茄晚疫病的共25株并且其中僅發(fā)現(xiàn)1種單倍型即ⅠR3。本研究基于PCR技術(shù)建立的病疫霉線粒體單