河豚魚成分熒光PCR檢測方法建立及應用.pdf

1、河豚魚肉質細嫩,味道鮮美,營養(yǎng)豐富,享有“魚中之王”的美譽,備受美食家的青睞。但是河豚魚內臟、卵巢、血液、魚皮、魚頭等部位含有劇毒,如加工處理不當或誤食常會引起中毒,甚至死亡。一般人由于沒有相關的專業(yè)知識,有時也會因為不能識別河豚魚而誤食引起中毒死亡,尤其是對于各種已經(jīng)加工成魚片、魚糜等產(chǎn)品,很難靠人的感觀來識別的；近年來,有人故意或無意地把河豚魚下腳料加工成魚片或魚糜,混在其他魚產(chǎn)品中,銷售到市場,甚至是國外,引起了食物中毒事件,這在

2、一定程度上影響了我國的魚糜制品的銷售信譽。本研究的目的是采用熒光PCR方法,建立了簡便、快速、準確的河豚魚成分檢測方法,用于相關魚產(chǎn)品的檢測。
　　 細胞色素B基因常用于魚類的分類、親緣關系、魚類物種鑒定、系統(tǒng)發(fā)育的標記等,本課題根據(jù)河豚魚細胞色素B基因序列,設計并合成引物和探針,從河豚魚細胞(組織)中提取DNA,擴增細胞色素B基因片段,回收PCR擴增片段,克隆到pGEM-T載體,重組質粒經(jīng)篩選、鑒定,抽提質粒,梯度稀釋作為陽性

3、標準品,用于標準曲線的制定和樣品檢測,通過優(yōu)化Mg2+、酶等反應條件,建立了實時熒光定量PCR技術平臺,并對其有效率、敏感性、特異性進行了檢測。該檢測技術對檢測河豚魚成分靈敏度可以達到100拷貝數(shù)左右,對暗鰭腹刺魨、黑腮兔頭魨、棕斑腹刺魨、陽性質粒、青占魚、竹莢魚、魷魚、帶魚、三文魚等進行特異性試驗,結果只有暗鰭腹刺魨黑腮兔頭魨、棕斑腹刺魨、陽性質粒出現(xiàn)了擴增曲線。在魚糜中混入一定量的河豚魚魚糜,采用五點采樣法和常規(guī)采樣法進行模擬樣品的