Ag85A及Ag85B DNA疫苗對移植性小鼠膀胱腫瘤免疫治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文研究目的：分別觀察Ag85A DNA疫苗和Ag85B DNA疫苗對移植性小鼠膀胱腫瘤的免疫治療作用，探討其在體內(nèi)的作用機(jī)制。 研究方法：擴(kuò)增前期已經(jīng)制備成功的分別含有pcDNA3.1-Ag85A和pcDNA3.1-Ag85B的細(xì)菌(Ecoli JM109)，從中大量提取相應(yīng)重組質(zhì)粒，并經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定。取1×10<'6>BTT739小鼠膀胱腫瘤細(xì)胞接種于T739小鼠左后肢內(nèi)側(cè)皮下，建立移植性小鼠膀胱腫瘤模型。并將40只荷

2、瘤小鼠隨機(jī)分為生理鹽水組、空白質(zhì)粒(pcDNA3.1)組、卡介苗(BCG)組、Ag85A DNA疫苗(pcDNA3.1-Ag85A)組和Ag85B DNA疫苗(pcDNA3.1-Ag85B)組，每組8只，雌雄各半。荷瘤第7d、14d和21d，于小鼠右后肢肌肉注射給藥。荷瘤第7d開始至第28d處死小鼠，每3d測量一次腫瘤長徑與短徑，并依據(jù)公式計(jì)算腫瘤體積，同時(shí)觀察荷瘤小鼠毛色、食欲和活動(dòng)情況。荷瘤第28d處死小鼠，剝離腫瘤稱重，依據(jù)公式計(jì)

3、算腫瘤生長抑制率，并對腫瘤組織行病理檢查。利用流式細(xì)胞儀分析荷瘤小鼠脾臟T細(xì)胞亞群數(shù)量。利用ELIsA的方法，檢測荷瘤小鼠血清IFN-γ含量。 研究結(jié)果： 1．經(jīng)雙酶切鑒定，成功提取重組質(zhì)粒pcDNA3.1-Ag85A和pcDNA3.1-Ag85B。 2．成功構(gòu)建移植性小鼠膀胱腫瘤模型，成瘤率為100％。 3．與生理鹽水、空白質(zhì)粒和Ag85A DNA疫苗相比，Ag85B DNA疫苗能夠明顯抑制腫瘤生長，但

4、其抑瘤作用弱于BCG，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。Ag85A DNA疫苗組與生理鹽水組、空白質(zhì)粒組比較，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。 4．腫瘤組織行病理檢查發(fā)現(xiàn)，BCG及Ag85B DNA疫苗組腫瘤組織中細(xì)胞壞死明顯，瘤體周圍及瘤體內(nèi)有大量炎細(xì)胞浸潤。在Ag85A DNA疫苗組、生理鹽水組和空白質(zhì)粒組的腫瘤組織中，細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤不明顯。 5．荷瘤小鼠脾臟T細(xì)胞亞群數(shù)量檢測結(jié)果顯示，與生理鹽水、空白質(zhì)

5、粒和Ag85A DNA疫苗相比，Ag85B DNA疫苗能夠顯著提高CD4<'+>T細(xì)胞亞群數(shù)量、CD8<'+>T細(xì)胞亞群數(shù)量和CD4<'+>T細(xì)胞與CD8<'+>T細(xì)胞的比值，但三項(xiàng)指標(biāo)均低于BCG組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)；Ag85A DNA疫苗組與生理鹽水組和空白質(zhì)粒組比較，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。 6．荷瘤小鼠血清IFN- γ含量檢測結(jié)果顯示，與生理鹽水組和空白質(zhì)粒組相比，Ag85A DNA疫苗與A

6、g85B DNA疫苗均能顯著促進(jìn)IFN-γ的分泌，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。其中Ag85B DNA疫苗組的IFN-γ的水平高于Ag85A DNA疫苗組，但二者均低于BCG組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。 研究結(jié)論： 1．單獨(dú)應(yīng)用Ag85B DNA疫苗可以誘導(dǎo)Th1免疫反應(yīng)，增加IFN-γ等細(xì)胞因子的分泌，提高荷瘤小鼠的細(xì)胞免疫功能，抑制腫瘤生長，但效果不及BCG。 2．尚不能認(rèn)為單獨(dú)應(yīng)用Ag85