抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白的制備、純化和生物學(xué)功能鑒定.pdf

1、目的：制備特異性抗牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis，P.gingivals)的雞卵黃免疫球蛋白(Immunoglobulin of Yolk，IgY),用兩步硫銨沉淀法純化總IgY,并鑒定和檢測該卵黃抗體的生物學(xué)性能。
　　方法：厭氧培養(yǎng) P.gingivals，將甲醛滅活的P.gingivals經(jīng)翅膀下淺層肌肉免疫150天齡羅曼母雞3次，每次間隔10d。取雞蛋用兩步硫酸銨沉淀法提取IgY,BCA法

2、測定蛋白質(zhì)含量,酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELLSA）檢測純化后IgY特異性和抗體效價變化，并進行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)分析。觀察抗Pg-IgY抑制紅細胞凝集。
　　結(jié)果：經(jīng)3次免疫后，Pg-IgY抗體滴度最高可達25600，純化后每個雞蛋可得約70mg總IgY,經(jīng)SDS-PAGE分析,純化的IgY

3、有1條主要蛋白帶,相對分子質(zhì)量(Mr)為180KDa,純度為65％，Western blotting分析發(fā)現(xiàn)該IgY抗體可以識別抗原P.gingivals。1mg/mlPg-IgY可以有效抑制P.gingivals生長。每孔3.125ug Pg-IgY可以有效抑制P.gingivals的紅細胞凝集活性。
　　結(jié)論：本研究得到的IgY產(chǎn)量和純度高，特異性強，在體外能夠特異性地結(jié)合P.gingivals，能夠有效抑制P.gingiva