抗人輪狀病毒卵黃免疫球蛋白的制備及性質(zhì)研究.pdf

1、為推動(dòng)我國功能性食品的發(fā)展，本文以自制的人輪狀病毒油乳滅活疫苗為抗原對產(chǎn)蛋雞進(jìn)行人工免疫，對特異性IgY的產(chǎn)生規(guī)律及性質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，得出結(jié)論如下： 1.以人-Wa株輪狀病毒作為抗原，制作油乳滅活疫苗。將所研制的疫苗按油乳疫苗的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行物理穩(wěn)定性及安全性檢驗(yàn)，結(jié)果表明該疫苗具有良好的穩(wěn)定性及安全性。 2.用該疫苗對產(chǎn)蛋雞以不同劑量(0.8×104TCID、1.6×104TCID、2.4×104TCID)分別進(jìn)行翅

2、下皮下、胸部肌肉免疫。免疫程序?yàn)槌趺庖淮危訌?qiáng)免疫兩次，每次免疫時(shí)間間隔均為7天。從初免第二天開始收集雞蛋，用水稀釋與硫酸銨兩步沉淀相結(jié)合的方法提取IgY，并用間接ELISA跟蹤檢測雞卵黃免疫球蛋白(IgY)活性，結(jié)果顯示：翅下皮下免疫組在初免后的第11天(OD450=0.286)開始出現(xiàn)特異性IgY，胸部肌肉免疫組在初免后的第13天(OD450=0.380)出現(xiàn)。免疫部位對特異性IgY活性變化幾乎沒有影響，免疫劑量對特異性IgY活性的

3、影響較為明顯，0.8×104TCID/mL劑量免疫所得IgY效價(jià)明顯低于1.6×104TCID/mL和2.4×104TCID/mL劑量免疫的卵黃抗體效價(jià)。特異性IgY變化規(guī)律：一免后卵黃抗體活性有微弱的升高，一次加強(qiáng)免后活性上升明顯，二次加強(qiáng)免后，在兩個(gè)月的時(shí)候特異性IgY活性達(dá)到峰值(OD450=1.67)，而且維持在較高的活性水平近兩個(gè)月之后開始下降。 3.SDS-PAGE電泳檢測IgY的理化性質(zhì)結(jié)果表明：在低于75℃條件下

4、，抗HRV-IgY性質(zhì)穩(wěn)定，在pH＜3.0、pH＞10的情況下容易發(fā)生變性，而在中性和弱堿性環(huán)境中有較好的穩(wěn)定性；胃蛋白酶、胰蛋白酶對抗HRV-IgY的穩(wěn)定性均具有不利的影響，水解時(shí)間越長影響越明顯。 4.間接ELISA檢測IgY的生物活性結(jié)果顯示：在低于75℃時(shí)，IgY的活性比較穩(wěn)定，但隨著溫度的上升，活性迅速下降。IgY在弱堿性、中性和弱酸性條件下都有較高的活性保留率，如IgY在pH4.0-9.0的環(huán)境中，4h后，仍保留50