酶聯(lián)免疫斑點法在輪狀病毒檢測及輪狀病毒中和試驗中的應(yīng)用.pdf

1、輪狀病毒是引起小兒腹瀉的主因。全球每年有超過1.25億嬰幼兒腹瀉是由輪狀病毒引起的,并造成超過60萬嬰幼兒的死亡,且大部分死亡病例都發(fā)生在不發(fā)達的亞非國家。針對輪狀病毒的治療目前還沒有特別有效的治療藥物,因此預(yù)防輪狀病毒就顯得至關(guān)重要;而預(yù)防輪狀病毒最有效的方法就是研制輪狀病毒疫苗,因此研制安全、廣譜、高效的輪狀病毒疫苗就成為當(dāng)今各國政府及世界衛(wèi)生組織(WHO)極為重要的任務(wù)。目前TCID50法是常用的檢測輪狀病毒感染力和輪狀病毒中和抗

2、體的方法,但由于TCID50法耗時長、主觀誤差大、工作量大等原因,限制其在大規(guī)模的篩選和試驗中應(yīng)用。因此建立一種快速、高效、準(zhǔn)確的輪狀病毒和輪狀病毒中和抗體的檢測方法對輪狀病毒的病毒學(xué)研究和輪狀病毒疫苗的開發(fā)都具有重要的作用和意義。
　　 本論文建立了輪狀病毒的分離,鑒定和擴大培養(yǎng)的方式,通過收集和分離培養(yǎng)不同的輪狀病毒為以后的輪狀病毒病毒學(xué)研究做準(zhǔn)備。同時建立了一種新型的快速、高效輪狀病毒及輪狀病毒中和抗體的檢測法——酶聯(lián)免疫

3、斑點法,該方法是以酶聯(lián)免疫斑點法和ELISPOT自動化掃描儀為基礎(chǔ),借助針對針對輪狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP6的特異性酶標(biāo)抗體7H11和VP6的特異性反應(yīng),通過TMB顯色反應(yīng)以區(qū)別感染和未感染細胞來實現(xiàn)檢測的;在本論文中還從可靠性,穩(wěn)定性等方面對建立的輪狀病毒酶聯(lián)免疫斑點法進行驗證,通過對比發(fā)現(xiàn)新建立的輪狀病毒酶聯(lián)免疫斑點法不僅具有快速、可靠、準(zhǔn)確等特點,而且還和傳統(tǒng)的TCID50檢測法具有很好的相關(guān)性。新建立的輪狀病毒酶聯(lián)免疫斑點法不僅可以用