河北地區(qū)漢族人群megsin基因多態(tài)性與糖尿病腎病的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetesmellitus,DM)最常見(jiàn)及最嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥之一,它己成為導(dǎo)致終末期腎衰竭(ESRD)的主要病因之一。近年來(lái),糖尿病腎病的發(fā)病率逐年升高,給社會(huì)和家庭都帶來(lái)的沉重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究表明,糖尿病腎病的發(fā)病與多元醇通路激活、蛋白激酶C激活、氧化應(yīng)激、腎血流動(dòng)力學(xué)改變、血管活性物質(zhì)、細(xì)胞因子、易感基因背景等多方面因素有關(guān),但糖尿病腎

2、病的具體發(fā)病機(jī)制目前尚未確切明了。因此,探索DN的發(fā)病機(jī)制及防治策略成為目前國(guó)內(nèi)外。腎臟病學(xué)者熱切關(guān)注的課題。
　　 Megsin(mesangial cell-predominant gene with a homology to serpin)是一種在系膜細(xì)胞優(yōu)勢(shì)表達(dá)的基因,屬絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族。megsin基因位于人類第18號(hào)染色體的長(zhǎng)臂21.3區(qū),長(zhǎng)約20kb,包括8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子。研究證實(shí)megsin在糖尿

3、病腎病的腎組織中表達(dá)增強(qiáng),與腎臟細(xì)胞外基質(zhì)積聚、腎臟肥大及腎功能受損程度相一致,提示megsin在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中起一定作用。
　　 本課題擬通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性探討河北地區(qū)漢族人群megsin基因C2093T多態(tài)性與糖尿病腎病的發(fā)病關(guān)系,旨在對(duì)糖尿病腎病的診斷及防治提供分子遺傳學(xué)的理論依據(jù)。
　　 對(duì)象與方法:隨機(jī)選取2009年10月～2010年10月期間在我院腎內(nèi)科及內(nèi)分泌科住院的2型糖尿病患

4、者158例,按尿微量白蛋白將其分為單純糖尿病組84例和糖尿病腎病組74例。在糖尿病腎病組中,又根據(jù)其尿蛋白及肌酐水平分為微量蛋白尿組42例、臨床蛋白尿組15例和腎功能不全組17例。同時(shí)隨機(jī)選取在我院進(jìn)行體檢的健康無(wú)糖尿病對(duì)照者80例作為正常對(duì)照組。分別取各受試者的肘靜脈血3ml,用于提取基因組DNA及檢測(cè)各項(xiàng)生化指標(biāo)。用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性法(PCR-RFLP)檢測(cè)158例2型糖尿病患者和80例正常對(duì)照者的megsin

5、C2093T基因型多態(tài)性。同時(shí)檢測(cè)各受試者的HbA1c、血糖、膽固醇、甘油三酯、肌酐、尿素氮等生化指標(biāo),測(cè)量血壓、身高、體重,計(jì)算體重指數(shù)(Body mass index,BMI)。使用Hardy-Winberg平衡檢驗(yàn)法對(duì)megsinC2093T各基因型分布頻率進(jìn)行檢驗(yàn)。對(duì)所有計(jì)量資料均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),正態(tài)分布的資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示,非正態(tài)分布的資料采用中位數(shù)及四分位數(shù)間距表示,計(jì)量資料的組間比較用方差分析或秩和檢驗(yàn);計(jì)

6、數(shù)資料組間比較用x2檢驗(yàn);使用Logistic回歸分析來(lái)檢測(cè)2型糖尿病發(fā)生糖尿病腎病的危險(xiǎn)因素。所有操作均使用SPSS17.0軟件執(zhí)行,P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1各組間的生化指標(biāo)及臨床指標(biāo)分析
　　 與健康對(duì)照組相比,2型糖尿病組的BMI、收縮壓、舒張壓、肌酐、尿素、血糖、甘油三酯、膽固醇均明顯升高(P＜0.05或0.01)。與單純糖尿病組相比,糖尿病腎病組的收縮壓、舒張壓、肌酐、尿素氮

7、明顯升高(P＜0.05或0.01)。與微量蛋白尿組相比,臨床蛋白尿組和腎功能不全組的收縮壓、尿蛋白明顯升高(P＜0.05或0.01),與微量蛋白尿組及臨床蛋白尿組相比,腎功能不全組的病程、收縮壓、舒張壓、肌酐、尿素、尿蛋白均明顯升高(P＜0.05或0.01)。
　　 2 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果及對(duì)各基因型Hardy-Winberg平衡檢驗(yàn)
　　 Megsin基因C2093T位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增片段全長(zhǎng)為256bp,PCR擴(kuò)增

8、片段與限制性內(nèi)切酶HaeⅢ反應(yīng)后,經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳,結(jié)果分為以下三種:僅1條長(zhǎng)為256bp條帶的為TT基因型,有114bp、142bp兩條條帶的為CC基因型,有114bp、142bp、256bp三條條帶的為CT基因型。健康對(duì)照組、單純糖尿病組及糖尿病腎病組三組研究對(duì)象的megsin基因C2093T各基因型分布頻率符合Hdary-Weinbger平衡,三組研究對(duì)象的x2值分別為2.22、3.34.、2.87,P值均大于0.05,說(shuō)明該

9、研究對(duì)象具有較好的群體代表性。
　　 3各組中基因型及等位基因的分布
　　 糖尿病組和健康對(duì)照組的megsin基因C2093T基因型及等位基因頻率均無(wú)明顯差異。在糖尿病組中,單純糖尿病組和糖尿病腎病組的C2093T基因型有顯著性差異,糖尿病腎病組的CT基因型頻率顯著高于單純糖尿病組(48.65％ vs30.95％,P＜0.05),等位基因頻率無(wú)明顯差異。在糖尿病腎病組中,微量蛋白尿組、臨床蛋白尿組和腎功能不全組三組間C2

10、093T基因型及等位基因無(wú)顯著性差異。
　　 4各基因型間的生化指標(biāo)、臨床指標(biāo)和糖尿病。腎病發(fā)生率的分析。
　　 糖尿病患者的各基因型組間年齡、性別、病程、BMI、血壓、血糖、HbA1c、肌酐、尿素、甘油三酯、膽固醇、尿蛋白排泄率均無(wú)顯著性差異(P值均＞0.05)。在糖尿病患者中,糖尿病腎病發(fā)生率在CT基因型中為58.06％,顯著高于TT基因型的25.00％(x2=4.410,P＜0.05)和CC基因型的41.67％(X

11、2=3.84,P=0.05)。與TT基因型相比,CT基因型的糖尿病腎病發(fā)病率的危險(xiǎn)度OR=4.145,95％CI1.024-16.855,即CT基因型的患糖尿病腎病的風(fēng)險(xiǎn)是TT基因型的4.154倍。與CC基因型相比,CT基因型糖尿病腎病發(fā)病率的危險(xiǎn)度OR=1.938,95％CI0.997-3.770,即CT基因型的患糖尿病腎病的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型的1.938倍。
　　 5糖尿病發(fā)生糖尿病腎病的危險(xiǎn)因素分析
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