蛋白酪氨酸激酶及雷洛昔芬對心肌離子通道調(diào)控作用的研究.pdf

1、第一部分蛋白酪氨酸激酶和磷酸酶對心肌鈉通道調(diào)控作用的研究 蛋白酪氨酸激酶(proteintyrosinekinase，PTKs)是參與細(xì)胞肥大、增殖、遷移、分化、凋亡等基本生命過程的重要信號分子，可以特異性地磷酸化蛋白肽鏈中的酪氨酸殘基，從而調(diào)控蛋白質(zhì)(包括離子通道蛋白)的功能。蛋白磷酸酶(proteinphosphatase)是指具有催化已磷酸化的蛋白分子發(fā)生去磷酸化反應(yīng)的一類酶分子，與蛋白激酶相對應(yīng)存在，共同構(gòu)成磷酸化和去磷

2、酸化這一重要的蛋白質(zhì)活性的開關(guān)系統(tǒng)，如同“陰”與“陽”說法，形成一種平衡，如蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶(proteintyrosinephosphatases，PTPs)，在蛋白磷酸化及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。近來諸多研究表明酪氨酸殘基上的蛋白磷酸化可調(diào)控離子通道，包括Ca2+通道和某些種類的K+通道，還有容量激活的Cl-通道。關(guān)于PTKs如何調(diào)控心臟INa的研究很少見，INa是否受PTKs和PTPs相互作用的影響目前也尚不清楚。本

3、研究以豚鼠心室肌細(xì)胞為對象，應(yīng)用多種PTKs和PTPs特異性抑制劑，采取全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，免疫沉淀和免疫印跡法等研究PTKs和PTPs能否及如何調(diào)控INa，為細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)物質(zhì)對離子通道的調(diào)控提供進(jìn)一步的認(rèn)識。 一、表皮生長因子受體(EGFR)家族PTK抑制劑B56對豚鼠心室肌細(xì)胞鈉電流的影響 二、血小板衍生生長因子受體(platelet-derivedgrowthfactorreceptor,PDGFR)家族PTK抑制

4、劑TyrphostinAGl295和非受體型Src家族PTK抑制劑PP2對豚鼠心室肌細(xì)胞鈉電流的作用 三、PTP抑制劑orthovanadate(VO43-)對豚鼠心室肌鈉電流的影響 四、VO43-對B56作用的影響 五、表皮生長因子(EGF)對豚鼠心室肌鈉電流的影響 六、鈉通道酪氨酸磷酸化水平的變化 結(jié)論 1.EGFR家族PTK抑制劑B56顯著性抑制INa，提示EGFR家族PTK可能參與

5、INa的調(diào)控。 2.PDGFR家族PTK抑制劑TyrphostinAG1295和非受體型Src家族PTK抑制劑PP2對INa無明顯作用，提示這兩個(gè)家族PTK可能不參與INa的調(diào)控。 3.PTP抑制劑VO43-顯著性增加INa，提示PTP可能參與INa的調(diào)控。 4.VO43-可影響B(tài)56對INa的作用，提示INa可能受PTKs和PTPs相互影響的調(diào)控。 5.EGF可顯著性增加INa，提示EGF可能通過EGF

6、R調(diào)控INa。 6.鈉通道酪氨酸磷酸化水平發(fā)生相應(yīng)改變，提示PTPs和EGFR激酶共同影響鈉通道蛋白磷酸化。 本研究為心臟鈉電流受細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)物質(zhì)的調(diào)控提供了新的認(rèn)識：INa受PTKs和PTPs相互作用的影響，PTPs負(fù)向調(diào)控INa，而EGFR家族PTK正向調(diào)控INa，提示心臟電興奮性可能被PTKs和PTPs的平衡所調(diào)控。 第二部分選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑雷洛昔芬對心肌離子通道的影響 雷洛昔芬(Ralox

7、ifene，RLX)是第二代選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，目前臨床上主要用于治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥。由于其有良好的組織選擇性，對生殖系統(tǒng)沒有明顯的刺激作用，已引起人們的廣泛關(guān)注。已證實(shí)雷洛昔芬可通過雌激素受體介導(dǎo)或非雌激素受體依賴機(jī)制影響血管壁功能及血脂調(diào)節(jié)而發(fā)揮心血管保護(hù)作用。近來有研究表明雷洛昔芬可抑制豚鼠心室肌細(xì)胞L型鈣電流并縮短動(dòng)作電位時(shí)程。但雷洛昔芬是否影響心臟其它離子通道目前尚未見報(bào)導(dǎo)。本工作研究雷洛昔芬對心臟幾種重要的離子通道

8、電流的作用，為進(jìn)一步探討雷洛昔芬對心臟的直接作用提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 一、雷洛昔芬對人心房瞬時(shí)外向鉀電流和超快激活的延遲整流鉀電流的影響 二、17β-雌二醇對人心房瞬時(shí)外向鉀電流和超快激活的延遲整流鉀電流的影響 三、雷洛昔芬對克隆的人心臟延遲整流鉀電流的影響 結(jié)論 1.雷洛昔芬可明顯抑制Itol和Ikur,且作用不受雌激素受體拮抗劑ICI182，780的影響。 2.17β-雌二醇對