眼肌型和全身型重癥肌無力患者外周血Tfh細(xì)胞及相關(guān)分子表達(dá)研究.pdf

1、重癥肌無力(Myastheniagravis,MG)是發(fā)生在神經(jīng)肌肉接頭處傳遞障礙的獲得性自身免疫性疾病。位于神經(jīng)肌肉接頭突觸后膜的乙酰膽堿受體(Acetylcholinereceptor,AchR)與其特異性抗體結(jié)合,損害突觸后膜導(dǎo)致神經(jīng)肌肉接頭處的信號傳導(dǎo)障礙,引起骨骼肌易疲勞。活動后肌無力加重,休息或應(yīng)用膽堿酯酶抑制劑后癥狀減輕,肌無力癥狀呈典型的“晨輕暮重”現(xiàn)象?？乖贵w反應(yīng)在MG發(fā)病過程中起著關(guān)鍵作用。MG主要是體液免疫介導(dǎo)的

2、結(jié)果,一般認(rèn)為體內(nèi)產(chǎn)生的特異性AchR抗體與神經(jīng)肌肉接頭處后膜的AchR結(jié)合后,誘發(fā)體內(nèi)免疫應(yīng)答的產(chǎn)生,在補體介導(dǎo)形成膜攻擊復(fù)合物的作用下,造成對AchR破壞,AchR數(shù)量的減少和結(jié)構(gòu)的破壞,其誘發(fā)動作電位的功能下降,因而出現(xiàn)肌無力癥狀。
　　目前公認(rèn),MG的發(fā)生、發(fā)展與胸腺內(nèi)的異常免疫應(yīng)答有關(guān),這種異常的免疫應(yīng)答導(dǎo)致抗原特異性抗體的產(chǎn)生。在MG患者中正常胸腺占15％-20%,78%-80%的MG患者存在不同程度是胸腺異常,胸腺增

3、生占65%-75%,胸腺瘤占10%-15%。胸腺是T細(xì)胞發(fā)育、分化以及成熟的場所,在T細(xì)胞分化、成熟過成中,胸腺主要通過兩種方式消除異常的T細(xì)胞克隆,陽性選擇只允許能夠識別MHC分子的T細(xì)胞克隆存活,陰性選擇消除那些與MHC分子作用過強,以及同時識別MHC分子和自身抗原的T細(xì)胞克隆。可見胸腺在免疫耐受的形成和維持中起著重要的作用,這種免疫耐受包括中樞耐受和外周耐受。如果通過各種機制導(dǎo)致這用免疫耐受的破壞,那么特異性自身免疫T細(xì)胞就會產(chǎn)生

4、,在其直接作用下或者在其介導(dǎo)下通過多種細(xì)胞、細(xì)胞因子產(chǎn)生自身免疫疾病。
　　MG是乙酰膽堿受體特異性抗體作用的結(jié)果,而抗體的產(chǎn)生是B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞的直接結(jié)果,并且抗體的滴度與漿細(xì)胞的數(shù)量與功能狀態(tài)密切相關(guān)。在B細(xì)胞增殖、分化為漿細(xì)胞,分泌抗體的過程中,一種新的CD4+T細(xì)胞亞群起著至關(guān)重要的作用,這類細(xì)胞遷移至淋巴濾泡輔助B細(xì)胞,產(chǎn)生抗體,產(chǎn)生體液免疫反應(yīng),故而這類CD4+T細(xì)胞稱為濾泡輔助性T細(xì)胞(Follicularhelp

5、erTcell,Tfhcell)。Tfh與其他T細(xì)胞亞群不同,其輔助B細(xì)胞的增殖、分化以及抗體類別轉(zhuǎn)化和抗體分泌的作用相比起他T細(xì)胞亞群作用更加強大。MG是體液免疫介導(dǎo)的結(jié)果,因而Tfh細(xì)胞與B細(xì)胞的相互作用可能在MG的發(fā)病過程中起著重要作用。本實驗通過流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry,FCM)檢測Tfh細(xì)胞以及相關(guān)分子在MG患者外周血的表達(dá),通過比較這些分子的表達(dá)差異,闡釋Tfh細(xì)胞在MG發(fā)病的作用和Tfh細(xì)胞與MG臨床癥狀的關(guān)

6、系。
　　實驗方法：
　　取2011-2012年唐都醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科MG患者外周血標(biāo)本為研究對象,其中OMG患者14例,GMG患者22例,正常對照患者11例。運用FCM檢測Tfh細(xì)胞及其相關(guān)分子在OMG和GMG患者外周血的表達(dá)。本實驗以CD4+CXCR5+T細(xì)胞代表Tfh細(xì)胞,觀察Tfh細(xì)胞在不同組間的表達(dá)。檢測分析CD4+Bcl-6+T細(xì)胞、CD4+ICOS+T細(xì)胞在OMG和GMG組的不同表達(dá),同時檢測血清中CXCLl3的表達(dá)

7、水平,分析絕對評分和QMG評分與CXCLl3的相關(guān)性。
　　結(jié)果:1.對照組、OMG和GMG組患者外周血其CXCR5的表達(dá)依次增高,CXCR5+CD4+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比分別為9.5±2.3%、12.0±1.8%、14.2±2.1%,其中對照組最低,GMG組最高,經(jīng)方差分析,3組之間存在統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05);2.ICOS在對照組、OMG和GMG組患者外周血表達(dá)依次增高,ICOS+CD4+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比

8、分別為0.09±0.02%、0.11±0.02%、0.14±0.05%,其中對照組最低,GMG組最高,經(jīng)方差分析,3組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05);3.Bcl-6在對照組、OMG和GMG組患者外周血表達(dá)依次增高,Bcl-6+CD4+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比分別為2.41±0.35%、3.32±0.41%、3.98±0.36%,其中對照組最低,GMG組最高,經(jīng)方差分析,3組之間存在統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05);4對照組、OMG