異基因造血干細(xì)胞移植后aGVHD與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、Il-35、TREC的相關(guān)性分析.pdf

1、[研究背景與目的]
　　 異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneichematopoieticstemcelltransplantation，allo-HSCT)是目前治療急性白血病等惡性血液病的有效方法，移植物抗宿主病(graftversushostdisease，GVHD)是異基因造血干細(xì)胞移植后的一個(gè)極為重要的并發(fā)癥，尋找有效的生物學(xué)指標(biāo)以預(yù)測(cè)GVHD的發(fā)生發(fā)展對(duì)移植后患者的康復(fù)有重要的意義。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulato

2、ryTcells，Treg)在1995年首次報(bào)道，并被命名為CD4+CD25+Treg，而后發(fā)現(xiàn)，叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子(theforkheadorwingedhelixtranscription，F(xiàn)oxp3)是Treg細(xì)胞的另一個(gè)特征性標(biāo)志，現(xiàn)許多研究已證明此類(lèi)細(xì)胞在維持機(jī)體免疫耐受和免疫應(yīng)答穩(wěn)態(tài)方面有重要作用。白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-35是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的由Treg分泌的抑制性細(xì)胞因子，對(duì)免疫反應(yīng)起負(fù)向調(diào)節(jié)作用，有研究表明

3、IL-35在體外能直接抑制CD4+T效應(yīng)細(xì)胞(Teffectorcell，Teff)增殖，同時(shí)Tregs中IL-35的大量表達(dá)與其抑制能力相關(guān)。作為判斷胸腺近期輸出功能的指標(biāo)，T細(xì)胞受體重排刪除環(huán)(TcellreceptorexcisionDNAcircles，TRECs)在評(píng)價(jià)移植后患者的免疫重建功能上有重要作用，而TREC是否參與移植物抗宿主病的發(fā)生尚未完全明了。本研究旨在檢測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后發(fā)生急性移植物抗宿主病(acute

4、graftversushostdisease,aGVHD)的患者外周血中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、轉(zhuǎn)錄因子Foxp3mRNA、細(xì)胞因子IL-35及T細(xì)胞中受體重排刪除環(huán)的水平并探討各參數(shù)之間的相互關(guān)系，以期獲得能夠有效預(yù)測(cè)患者發(fā)生aGVHD的生物學(xué)指標(biāo)。
　　 [研究對(duì)象與方法]
　　 外周血樣品采集自接受造血干細(xì)胞移植術(shù)的患者，其中男17例，女6例，年齡8-46歲，aGVHD陽(yáng)性組13例，aGVHD陰性組10例，同時(shí)將21例年齡及

5、性別相匹配的健康人作為對(duì)照組。將aGVHD陽(yáng)性組參照Glucksberg標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行嚴(yán)重度分級(jí)，分為Ⅰ-Ⅱ度aGVHD組與Ⅲ-Ⅳ度aGVHD組。采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)各組外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞占CD4+T淋巴細(xì)胞的百分比，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中Foxp3轉(zhuǎn)錄因子的相對(duì)表達(dá)量和TREC水平，并且應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)外周血血漿中Treg相關(guān)細(xì)胞因子IL-35的

6、表達(dá)水平。
　　 [研究結(jié)果]
　　 (1)aGVHD陽(yáng)性組外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞百分比、單個(gè)核細(xì)胞中Foxp3轉(zhuǎn)錄因子的相對(duì)表達(dá)量、血漿中IL-35的表達(dá)水平較aGVHD陰性組和正常對(duì)照組明顯降低(P＜0.05);且經(jīng)有效治療后各指標(biāo)顯著升高（P＜0.05）。
　　 (2)aGVHD陽(yáng)性組中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞百分比、Foxp3mRNA的相對(duì)表達(dá)量與aGVHD的嚴(yán)

7、重度分級(jí)成負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。
　　 (3)配對(duì)樣本資料分析顯示，aGVHD發(fā)生時(shí)外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞百分比、Foxp3mRNA的相對(duì)表達(dá)量與aGVHD發(fā)生前1～2周相比明顯下降（P＜0.05）。
　　 (4)部分移植后患者未能檢測(cè)出TREC，aGVHD陰性組中有7例患者TREC水平在移植后隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸恢復(fù)，aGVHD陽(yáng)性組TREC水平低于aGVHD陰性組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05

8、)，同時(shí)二者均明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。aGVHD陽(yáng)性組中TREC水平與CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞百分比、Foxp3mRNA的相對(duì)表達(dá)量、IL-35表達(dá)水平均無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。
　　 [研究結(jié)論]
　　 異基因造血干細(xì)胞移植后患者發(fā)生aGVHD時(shí)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的百分比、其轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)量及IL-35水平均發(fā)生明顯降低，且在治療后明顯升高，說(shuō)明造血干細(xì)胞移植后急