姜黃素聯(lián)合硼替佐米對骨髓瘤細(xì)胞的作用及機理.pdf

1、【研究背景】
　　多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是來源于終末分化的B淋巴細(xì)胞的惡性腫瘤，以骨髓中大量漿細(xì)胞的克隆性增生為顯著特征，MM目前仍然不可治愈。骨髓微環(huán)境與MM的增殖、遷移、存活、耐藥及骨病的發(fā)生有著密切的關(guān)系，核因子κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB）信號途徑是MM發(fā)病過程中起著重要作用的轉(zhuǎn)

2、錄調(diào)節(jié)因子。硼替佐米（bortezomib,商品名：Velcade）作為治療MM的一種新藥，其有效性在臨床上已得到了廣泛的認(rèn)可。然而隨著硼替佐米的廣泛應(yīng)用，臨床上出現(xiàn)骨髓瘤細(xì)胞對硼替佐米耐藥的情況。姜黃素（curcumin）是從姜黃等植物中提取的一種黃色色素，有廣泛的抗腫瘤效應(yīng)，體外實驗已證實姜黃素能夠通過抑制核因子NF-κB活化抑制多種MM細(xì)胞系的生長增殖。鑒于目前MM難治性，作為一種安全低毒的藥物，姜黃素與硼替佐米聯(lián)合有望成為一種新

3、的治療MM的方法。
　　【目的】
　　探討姜黃素、硼替佐米對人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系H929細(xì)胞增殖和凋亡的影響，并進一步探討兩者聯(lián)合用藥的協(xié)同效應(yīng)及相關(guān)機理。
　　【方法】
　　用姜黃素和硼替佐米在不同濃度時單藥或聯(lián)合用藥處理H929細(xì)胞，通過MTT法檢測兩者對H929細(xì)胞的增殖抑制作用。鏡下觀察給藥后H929細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry,FCM）觀察兩者對H929細(xì)胞凋亡的影響。

4、采用RT-PCR方法檢測兩藥物單獨或聯(lián)合用藥時，凋亡相關(guān)基因bcl-2/bax及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclin D1在不同濃度的姜黃素和硼替佐米單藥或聯(lián)合用藥時表達(dá)的變化。運用免疫熒光染色法測定NF-κBp65蛋白經(jīng)過不同處理后在H929細(xì)胞內(nèi)的分布變化。
　　【結(jié)果】
　　姜黃素和硼替佐米單藥及聯(lián)合應(yīng)用時均可抑制H929細(xì)胞的增殖，并且這種抑制作用呈劑量依賴性。與姜黃素和硼替佐米單獨用藥相比，兩者聯(lián)合應(yīng)用時，在一定濃度范圍內(nèi)

5、表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)；鏡下觀察H929細(xì)胞經(jīng)姜黃素和硼替佐米作用后出現(xiàn)形態(tài)學(xué)上變化的差異，聯(lián)合組比單藥組在形態(tài)學(xué)上的變化更為明顯；聯(lián)合用藥組骨髓瘤細(xì)胞凋亡的比例明顯高于單藥組及對照組（P<0.05）；與單獨用藥組相比，聯(lián)合用藥組Cyclin D1和bcl-2基因的表達(dá)均下降，而bax表達(dá)升高（P<0.05）。核因子NF-κBp65蛋白在未處理組主要表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi)，NF-κBp65在單藥處理組的胞核內(nèi)表達(dá)減弱，聯(lián)合應(yīng)用組NF-κBp65蛋白主要