硼替佐米聯(lián)合地西他濱對多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226作用的實驗研究.pdf

1、目的：觀察硼替佐米（BTZ）單藥或聯(lián)合地西他濱（DAC）在體外對多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226增殖、凋亡、細胞周期的影響，探討兩藥聯(lián)合的可能效應。倒置相差顯微鏡成像觀察細胞增殖與凋亡。
　　方法：多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226以BTZ5nmol/L(5nM)、10nmol/L(10nM)、20nmol/L(20nM)單藥或聯(lián)合DAC0.5mmol/L(0.5mM)處理48小時后，采用倒置相差顯微鏡成像技術觀察各處理組的細胞

2、狀態(tài)；CCK-8（cell counting kit-8）法檢測細胞活率和增殖抑制率；Annexin-V/PI雙染法檢測細胞凋亡的變化；流式細胞儀檢測細胞周期的變化；蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測凋亡相關蛋白caspase-3、caspase-9、PARP-1的表達。
　　結(jié)果：
　　(1)倒置相差顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：與 DMSO對照組相比，BTZ單藥組及DAC單藥組中細胞密度降低，出現(xiàn)細胞碎片。當BTZ聯(lián)合DA

3、C時，這些變化更加顯著；
　　(2)在BTZ單藥處理組中，隨著BTZ濃度增加，細胞活率逐漸降低（p<0.05），相同BTZ濃度下，DAC+BTZ組活率明顯減少。BTZ對骨髓瘤細胞的增殖抑制作用與劑量正相關，與 BTZ單藥組相比，DAC和 BTZ聯(lián)合組對骨髓瘤細胞的增殖抑制作用更為顯著（p<0.05），采用金式公式計算協(xié)同指數(shù)：不同濃度BTZ（5nM、10nM、20nM）聯(lián)合DAC時的q值分別為1.54、1.23、1.06，根據(jù)金式

4、公式的判斷標準BTZ（5nM、10nM）與DAC聯(lián)合有協(xié)同作用，BTZ（20nM組）與DAC有相加作用；
　?。?） Annexin-V/PI雙染法檢測細胞凋亡證實BTZ及DAC單藥可誘導RPMI8226發(fā)生凋亡。其中隨著BTZ的濃度增加，凋亡細胞比率增加，差異明顯（p<0.05）。相比于單藥組，DAC+BTZ合用組凋亡細胞比率增高，具有統(tǒng)計學差異（p<0.05）；
　?。?）細胞周期檢測顯示：與DMSO對照組相比，BTZ單

5、藥處理組中，隨著BTZ濃度增加，G0-G1期細胞比率遞增，S期、G2-M期細胞比率遞減（p<0.05）；與BTZ單藥及DAC單藥組相比，DAC+BTZ聯(lián)合組對RPMI8226的G0-G1期阻滯作用更加顯著（p<0.05）。
　?。?） Western blot方法檢測凋亡相關蛋白顯示：BTZ在48 h可以導致RPMI8226細胞內(nèi)的PARP-1發(fā)生剪切，同時caspase-3和caspase-9的剪切激活片段也同樣增加，當BTZ與

6、DAC聯(lián)用時，細胞內(nèi)PAPR-1的剪切以及caspase-3、caspase-9的剪切活化也更加的明顯。
　　結(jié)論：
　?。?）BTZ對RPMI8226細胞有明顯的增殖抑制，促進凋亡和G0-G1周期阻滯作用，并且與BTZ濃度呈正相關，DAC對RPMI8226細胞也有明顯的增殖抑制，促進凋亡和G0-G1周期阻滯作用，
　?。?）兩藥合加在BTZ不同濃度有不同的相互作用，在低濃度5nM和中濃度10nM時有協(xié)同作用，在高濃度