噻嗎洛爾對多發(fā)性骨髓瘤細胞RPMI8226增殖的影響及機制探討.pdf

1、目的：本研究旨在探討噻嗎洛爾對人多發(fā)性骨髓瘤細胞RPMI8226增殖與凋亡的影響，并探索其可能作用的分子機制，從而為多發(fā)性骨髓瘤的臨床治療提供實驗依據(jù)。
　　方法:培養(yǎng)人多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226,在培養(yǎng)的細胞中加入不同濃度噻嗎洛爾,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法檢測噻嗎洛爾對人多發(fā)性骨髓瘤細胞的抑制率并篩選研究濃度用于后續(xù)實驗；采用流式細胞術檢測不同濃度噻嗎洛爾誘導骨髓瘤細胞的凋亡情況；同時利用qRT-PCR和蛋白印跡

2、技術分別檢測噻嗎洛爾作用后RPMI8226細胞中caspase-3、caspase-9、Bax和Bcl-2基因在mRNA和蛋白水平的表達情況,并對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果：MTT顯示，噻嗎洛爾作用RPMI8226細胞后，該細胞活力呈抑制效應，且在相同藥物作用時間前提下，抑制率隨藥物濃度的升高而增加，具有明顯的濃度依賴性（r=0.548, P=0.019）；同時，在相同藥物濃度作用前提下，抑制率隨藥物作用時間的延長而升高，

3、具有明顯的時間依賴性（r=0.659, P=0.003）；綜上，噻嗎洛爾對RPMI8226細胞呈抑制作用，且抑制率呈濃度—時間依賴性。流式細胞術顯示，噻嗎洛爾作用RPMI8226細胞72h后，2.5μmol/L、20μmol/L、50μmol/L噻嗎洛爾作用組細胞凋亡率分別為(7.17±0.06)％、(10.56±0.65)%、(15.27±0.86)%，與對照組(3.93±0.25)%相比均明顯升高(P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計學意義

4、，且細胞凋亡率隨藥物作用濃度增加而升高，具有濃度依賴性（r=0.953, P=0.047）。qRT-PCR示，噻嗎洛爾作用RPMI8226細胞72h后能夠顯著上調(diào)Bax、caspase-3、caspase-9的mRNA表達，顯著下調(diào)Bcl-2的mRNA表達(P＜0.05)。Western Blot結(jié)果顯示，與對照組相比20μmol/L噻嗎洛爾作用于RPMI8226細胞72h后，Bax蛋白表達水平顯著升高(P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計學意