自噬對多發(fā)性骨髓瘤細胞生存及增殖的影響及其可能機制.pdf

1、[目的]觀察雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤（3-MA）對體外正常培養(yǎng)及血清饑餓條件下多發(fā)性骨髓瘤(MM)細胞株生存及增殖的影響，分析其與自噬的相關(guān)性，并探討其可能機制。
　　 [方法]MM細胞株U266在正常及血清饑餓條件下分別加入雷帕霉素和3-MA，以正常培養(yǎng)U266細胞、淋巴瘤細胞株Jurkat及無血清培養(yǎng)Jurkat為對照組;采用CCK8法檢測細胞的增殖，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡;單丹磺酰尸胺(MDC)檢測細胞自噬：RT-PCR方

2、法檢測自噬基因mtor、Atg5、Beclinl表達；免疫印跡分析自噬標記蛋白微管相關(guān)蛋白輕鏈3Ⅰ/Ⅱ(LC3Ⅰ/Ⅱ)及溶酶體相關(guān)膜蛋白1(LAMP1)含量的變化。
　　 [結(jié)果]U266細胞內(nèi)在自噬水平高于Jurkat細胞，無血清培養(yǎng)可誘導(dǎo)U266細胞上調(diào)自噬水平，并可在血清饑餓狀態(tài)下維持增殖約72h;雷帕霉素促進U266細胞自噬并刺激其增殖,3-MA也具有上調(diào)U266的自噬和增殖作用，但作用時間短。無血清培養(yǎng)24h后，與正常

3、對照相比，U266細胞凋亡明顯上升，分別為1.7±0.2％和16.1±0.35%，(P＜0.05);加入雷帕霉素或3-MA后可抑制血清饑餓誘導(dǎo)的U266細胞凋亡，細胞凋亡率分別是6.2±0.76%和6.7±0.0.46%，(P＜0.01)，其作用隨著培養(yǎng)時間延長而減弱，細胞凋亡率趨于一致，至72h后3組細胞的凋亡基本相同，為30.0±1.87%、28.3±0.60%和29.0±0.90%(P＞0.05)，去除處理因素后細胞凋亡率減低。在

4、正常培養(yǎng)條件下雷帕霉素或3-MA可促進U266細胞凋亡，與對照組相比分別為1.7±0.2%、16.8±0.61%和19.1+1.0%(P＜0.01)，隨著培養(yǎng)時間的延長，雷帕霉素組細胞凋亡水無明顯變化（16.9±0.46）%，但細胞死亡率明顯上升達14.0±0.98%和21.5±1.15%，(P＜0.01)，而3-MA組凋亡水較前明顯下降（9.0±0.70%）。
　　 [結(jié)論]MM細胞內(nèi)存在基礎(chǔ)水平的自噬并高于淋巴瘤Jurkat