自噬對(duì)冬凌草甲素誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究冬凌草甲素對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞體外增殖、凋亡及自噬的作用,探討自噬對(duì)冬凌草甲素誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞凋亡的影響及可能的機(jī)制。
　　方法：采用MTT比色法檢測(cè)冬凌草甲素作用后RPMI8226細(xì)胞的增殖活性及其劑量-效應(yīng)關(guān)系;TUNEL、AnnexinV/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;MDC法檢測(cè)細(xì)胞自噬形態(tài)學(xué)變化;Westernblot免疫印跡技術(shù)檢測(cè)LC3-Ⅱ、p-S6K1、P65、IκB-1蛋白的表達(dá)。

2、r>　　結(jié)果：(1)冬凌草甲素對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的抑制作用,且這種作用呈一定的劑量和時(shí)間依賴性。作用24h的IC50為8.36μmol/L。(2)冬凌草甲素可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,TUNEL染色顯示10μmol/L冬凌草甲素作用于RPMI8226細(xì)胞24h后,可見典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變,AnnexinV/PI雙標(biāo)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的細(xì)胞凋亡率,與對(duì)照組相比明顯增高,Westernblot檢測(cè)冬凌草甲素引起P65的表達(dá)減少

3、,NF-κB上游調(diào)控基因IκB-1的表達(dá)上調(diào)且隨著時(shí)間的推移而增加;(3)冬凌草甲素可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬,10μmol/L冬凌草甲素作用24h后,MDC標(biāo)記的細(xì)胞自噬泡的熒光顆粒增多,熒光強(qiáng)度增加,Westernblot檢測(cè)冬凌草甲素引起LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)增加,而同時(shí)磷酸化的核糖體蛋白S6激酶1(p-S6K1)表達(dá)減少,S6K1是mTOR信號(hào)通路的下游底物,能被mTORC1磷酸化而活化,p-S6K1直接反應(yīng)mTOR信號(hào)通路的活化;(4)3

4、-MA能顯著抑制由冬凌草甲素誘導(dǎo)的RPMI8226細(xì)胞的自噬;3-MA抑制細(xì)胞自噬后,與冬凌草甲素單獨(dú)處理組相比,細(xì)胞凋亡率進(jìn)一步增高;同時(shí)細(xì)胞P65的表達(dá)進(jìn)一步減少,而IκB-1表達(dá)增加更加明顯。
　　結(jié)論：冬凌草甲素能夠明顯抑制RPMI8226的增殖,并能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,且該誘導(dǎo)凋亡作用與IκB-1的表達(dá)調(diào)控有關(guān);冬凌草甲素能誘導(dǎo)RPMI8226細(xì)胞發(fā)生自噬,該自噬誘導(dǎo)作用與mTOR信號(hào)通路受抑,下調(diào)S6K1的磷酸化有關(guān);通過(guò)3