自噬對冬凌草甲素誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞凋亡的影響及機制研究.pdf

1、目的：研究冬凌草甲素對人多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細胞體外增殖、凋亡及自噬的作用,探討自噬對冬凌草甲素誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞凋亡的影響及可能的機制。
　　方法：采用MTT比色法檢測冬凌草甲素作用后RPMI8226細胞的增殖活性及其劑量-效應關系;TUNEL、AnnexinV/PI流式細胞術檢測細胞凋亡;MDC法檢測細胞自噬形態(tài)學變化;Westernblot免疫印跡技術檢測LC3-Ⅱ、p-S6K1、P65、IκB-1蛋白的表達。

2、r>　　結果：(1)冬凌草甲素對人多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細胞增殖有較強的抑制作用,且這種作用呈一定的劑量和時間依賴性。作用24h的IC50為8.36μmol/L。(2)冬凌草甲素可以誘導細胞凋亡,TUNEL染色顯示10μmol/L冬凌草甲素作用于RPMI8226細胞24h后,可見典型的凋亡形態(tài)學改變,AnnexinV/PI雙標流式細胞術檢測的細胞凋亡率,與對照組相比明顯增高,Westernblot檢測冬凌草甲素引起P65的表達減少

3、,NF-κB上游調(diào)控基因IκB-1的表達上調(diào)且隨著時間的推移而增加;(3)冬凌草甲素可誘導細胞發(fā)生自噬,10μmol/L冬凌草甲素作用24h后,MDC標記的細胞自噬泡的熒光顆粒增多,熒光強度增加,Westernblot檢測冬凌草甲素引起LC3-Ⅱ蛋白表達增加,而同時磷酸化的核糖體蛋白S6激酶1(p-S6K1)表達減少,S6K1是mTOR信號通路的下游底物,能被mTORC1磷酸化而活化,p-S6K1直接反應mTOR信號通路的活化;(4)3

4、-MA能顯著抑制由冬凌草甲素誘導的RPMI8226細胞的自噬;3-MA抑制細胞自噬后,與冬凌草甲素單獨處理組相比,細胞凋亡率進一步增高;同時細胞P65的表達進一步減少,而IκB-1表達增加更加明顯。
　　結論：冬凌草甲素能夠明顯抑制RPMI8226的增殖,并能誘導細胞凋亡,且該誘導凋亡作用與IκB-1的表達調(diào)控有關;冬凌草甲素能誘導RPMI8226細胞發(fā)生自噬,該自噬誘導作用與mTOR信號通路受抑,下調(diào)S6K1的磷酸化有關;通過3