椎間盤退變程度與衰老信號(hào)途徑p16INK4a-Rb關(guān)系的初步研究.pdf

1、目的：探討衰老信號(hào)途徑p16INK4a/Rb與椎間盤退變程度之間的關(guān)系；
　　 方法：成年健康新西蘭白兔15只，隨機(jī)分為5組(每組3只)：第2到5組，每組，采用倒八字手術(shù)入路，針刺法制作椎間盤退變模型(L3/4、L4/5和L5/6)，分別在術(shù)后2周、4周、8周及12周時(shí)進(jìn)行相關(guān)檢查；第1組只進(jìn)行手術(shù)，而不針刺椎間盤，在術(shù)后12周時(shí)進(jìn)行同樣的檢查。各組在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)行MRI檢查，觀察椎間盤T2信號(hào)的變化情況。應(yīng)用改良Thompson

2、椎間盤退變分級(jí)系統(tǒng)對(duì)各組(L3/4、L4/5和L5/6)椎間盤進(jìn)行退變程度分級(jí)(見表1)。將各組(L3/4、L4/5和L5/6)椎間盤統(tǒng)一編號(hào)，并按照改良Thompson分級(jí)系統(tǒng)分為4組：A組(Ⅰ級(jí))、B組(Ⅱ級(jí))、C組(Ⅲ級(jí))和D組(Ⅳ級(jí))。在上述每組中隨機(jī)抽取3枚椎間盤，行組織學(xué)檢查，按照Nishimura椎間盤退變分級(jí)法進(jìn)行組織學(xué)評(píng)估(見表2)，采用免疫組化檢測(cè)Ⅱ型膠原對(duì)椎間盤退變模型進(jìn)行進(jìn)一步評(píng)價(jià)，采用Western blot檢

3、測(cè)其中p16INK4a和Rb的蛋白水平。
　　 結(jié)果：1)各組均成功實(shí)施手術(shù)，術(shù)后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行MRI檢查，改良Thompson椎間盤退變分級(jí)系統(tǒng)將椎間盤進(jìn)行分組：假手術(shù)組中有8枚椎間盤為Ⅰ級(jí)和1枚椎間盤為Ⅱ級(jí)；術(shù)后2周組有2枚Ⅰ級(jí)，6枚Ⅱ級(jí)和1枚Ⅲ級(jí)；術(shù)后4周組有5枚Ⅱ級(jí)和4枚Ⅲ級(jí)；術(shù)后8周組有2枚Ⅱ級(jí)，5枚Ⅲ級(jí)和2枚Ⅳ級(jí)；術(shù)后12周組有2枚Ⅲ級(jí)和7枚Ⅳ(Ⅳ級(jí))級(jí)。共計(jì)A組(Ⅰ級(jí))10枚，B組(Ⅱ級(jí))14枚，C組(Ⅲ級(jí))12枚

4、和D組9枚。
　　 2)采用Nishimura椎間盤退變分級(jí)法對(duì)上述椎間盤進(jìn)行組織學(xué)評(píng)估：A組有3枚0級(jí)；B組有1枚1級(jí)，2枚2級(jí)；C組有1枚1級(jí)，1枚2級(jí)和1枚3級(jí)；D組有1枚4級(jí)和2枚5級(jí)。
　　 3)各組Ⅱ型膠原免疫組化灰度值分別為：A組144.30±0.68，B組148.77±3.09，C組151.47±2.93和D組1.55.80±4.75。各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=14.36，P=0.01)。各組兩兩間

5、進(jìn)行比較，除B組和C組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外(P>0.05)，其余差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 4)各組p16INK4a相對(duì)蛋白含量為：A組0.20±0.05，B組0.56±0.31，C組0.92±0.09和D組1.62±0.24。各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=35.22，P<0.01)。各組兩兩間進(jìn)行比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。從A組到D組，隨著椎間盤退變程度的增加，p16INK4a相對(duì)蛋白含量呈

6、逐漸升高趨勢(shì)(P<0.05)。各組非磷酸化Rb相對(duì)蛋白含量為：A組0.51±0.04，B組0.88±0.19，C組1.114±0.13和D組1.71±0.27。各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=32.12，P<0.01)。各組兩兩間進(jìn)行比較，除B組和C組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外(P>0.05)，其余各組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。從A組到D組，隨著椎間盤退變程度的增加，Rb相對(duì)蛋白含量呈逐漸升高趨勢(shì)(P<0.05)。