中國(guó)人群中δ球蛋白基因的突變研究.pdf

1、δ地中海貧血是δ球蛋白鏈合成受抑制的一類遺傳性疾病?？刂痞那虻鞍祖満铣傻摩那虻鞍谆蛭挥诘?1號(hào)染色體類β球蛋白基因的基因簇上。和β球蛋白基因一樣,突變或者是微缺失能在δ球蛋白基因上發(fā)生δ球蛋白合成減少,有些還可伴有HbA2變異體的出現(xiàn)。雖然單純的δ球蛋白基因(HBD MIM＃142000)缺陷不能直接產(chǎn)生臨床相關(guān)癥狀,但它能干擾β地中海貧血的診斷,從而導(dǎo)致嚴(yán)重的后果。在研究中,從至廣州市婦女兒童醫(yī)療中心進(jìn)行地中海貧血篩查試驗(yàn)的4086

2、3例患者的血液樣本中挑選出167例進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)樣本需滿足以下條件:
　　(1)血液樣本毛細(xì)管電泳結(jié)果HbA2<2％,伴或不伴有HbA2變異體的存在;
　　(2)樣本血液學(xué)各項(xiàng)參數(shù)(如MCV、MCH等)正常;
　　(3)排除缺鐵性貧血等其他疾病。
　　研究結(jié)果:在挑選出的167例實(shí)驗(yàn)樣本中有152例樣本發(fā)現(xiàn)有δ球蛋白基因的缺陷,陽(yáng)性檢出率為91%。在本次研究中共發(fā)現(xiàn)了21種δ球蛋白基因缺陷類型,其中有12種

3、是之前未報(bào)道過(guò)的新發(fā)現(xiàn)的缺陷類型。其中-77(T>C)是中國(guó)人群δ球蛋白基因缺陷最普遍的類型,其次是-30(T>C),它們一起占所有缺陷的82.3%。當(dāng)患者為β地中海貧血和δ球蛋白基因缺陷的復(fù)合體時(shí),他/她的MCV、MCH水平可能降低但有正常的HbA2值,因此容易被誤診為缺鐵性貧血等其他疾病而導(dǎo)致β地中海貧血的漏診。因而,對(duì)于那些MCV、MCH降低但HbA2水平正?；蚺R界的患者不能僅僅考慮缺鐵性貧血或者是α—地中海貧血,特別是對(duì)于夫妻一

4、方已經(jīng)確診為β地貧,另一方表現(xiàn)出以上性狀的夫婦,對(duì)他/她做進(jìn)一步的α和β地中海貧血基因分析是非常有必要的,以預(yù)防重型β地貧患兒的出生。
　　一、目的：
　　1.調(diào)查中國(guó)人群中δ球蛋白基因缺陷率及各缺陷類型頻率。
　　2.δ球蛋白基因缺陷類型與HbA2水平之間的關(guān)系。
　　3.δ球蛋白基因缺陷類型與HbA2變異體之間的關(guān)系。
　　二、方法：
　　1.收集2010年5月至2012年5月至廣州市婦女兒童醫(yī)療

5、中心進(jìn)行地中海貧血毛細(xì)管電泳篩查實(shí)驗(yàn)的40863例患者血液標(biāo)本。
　　2.根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)定標(biāo)準(zhǔn):
　　(1)血液樣本毛細(xì)管電泳結(jié)果HbA2<2%,伴或不伴有HbA2變異體的存在;
　　(2)樣本血液學(xué)各項(xiàng)參數(shù)(如MCV、MCH等)正常;
　　(3)排除缺鐵性貧血等其他疾病。一共挑選出167例符合實(shí)驗(yàn)條件的樣本。
　　3.在Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中查找δ球蛋白基因序列,并根據(jù)http://globin.cse.psu

6、.edu/hbvar/menu.html中所公布的δ球蛋白基因缺陷類型,在δ球蛋白基因序列中標(biāo)記。參考近10年文獻(xiàn),并用PRIMER5.0進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。
　　4.摸索PCR反應(yīng)條件并進(jìn)行PCR,擴(kuò)增出所需片段。
　　5.對(duì)PCR擴(kuò)增片段進(jìn)行2%瓊脂糖電泳鑒定是否擴(kuò)增出目的片段。
　　6.大批量PCR擴(kuò)增出目的片段,并送華大基因公司進(jìn)行測(cè)序。
　　7.對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析和統(tǒng)計(jì)歸類。
　　三、結(jié)果：
　　

7、1.167例樣本中共有152例有δ球蛋白基因的缺陷,陽(yáng)性檢出率為91%。
　　2.在152例有δ球蛋白基因的缺陷的樣本中有5例在Sebia毛細(xì)血管電泳中發(fā)現(xiàn)了HbA2變異體,剩余的147例則僅有HbA2水平降低的表現(xiàn)。
　　3.共發(fā)現(xiàn)了21種δ球蛋白基因缺陷類型,其中9種為之前已知的突變:
　　1)-77(T>C);
　　2)-30(T>C);
　　3)HbA2-Troodos[δ116(G18)Arg→C

8、ys,CGC>TGC];
　　4)δ initiation codon[ATG>ATA];
　　5)HbA2 Liangcheng[δ117(G19)Asn→Asp,AAC>GAC];
　　6)HbA2 Coburg[δ116(G18)Arg→His,CGT>CAT];
　　7)HbA2-Wrens[δ98(FG5)Val→Met,GTG>ATG];
　　8)HbA2-Yialousa[δ27(B9)Ala

9、→Ser,GCC>TCC];
　　9)codon 4(ACT>ATT)]以及12種之前沒(méi)有報(bào)道過(guò)的新發(fā)現(xiàn)的球蛋白基因缺陷類型:
　　1)Codon 10(-G)(HBDc.31delG);
　　2)HbA2-Guangzhou[δ10(A7)Ala→Pro,GCT→GGT(HBDc.31G→C)];
　　3)HbA2-Qingyuan[δ17(A14)Lys→Thr,AAA→ACA(HBDc.53A>C)];

10、r>　　4)HbA2-Dongguan[δ21(B3)Asp→Gly,GAT→GGT(HBDc.65A>G)];
　　5)HbA2-Hunan[δ28(B10)Leu→Pro,CTG→CCG(HBDc.86T>C)];
　　6)HbA2-Huadu[δ42(CD1)Phe→Leu,TTT→CTT(HBDc.127T>C)];
　　7)HbA2-Conghua[δ44(CD3)Ser→Cys,TCC→TGC(HBDc.1

11、34C>G)];
　　8)Codons59-60(+GG)(HBDc.180_181dupGG);
　　9)Codon87(-A)(HBDc.263delA);
　　10)HbA2-Meizhou[δ108(G10)Asn→Asp,AAT→GAT(HBDc.325A>G)];
　　11)Codon113(+TG)(HBDc.341_342dupTG);
　　12)IVS-Ⅰ3′(AG>-G)(HBDc.93

12、-2delA)。
　　4.統(tǒng)計(jì)出δ球蛋白基因各缺陷類型頻率。
　　5.統(tǒng)計(jì)出δ球蛋白基因缺陷類型和對(duì)應(yīng)的HbA2水平。
　　四、結(jié)論：
　　1.中國(guó)人群中δ球蛋白基因最常見的缺陷類型為-77(T>C),其次為-30(T>C),一起占全部缺陷的82.3%。
　　2.中國(guó)人群中δ球蛋白基因突變率為0.4%。意味著δ球蛋白基因缺陷在中國(guó)人群中可能是很罕見的。因此,對(duì)于那些有正常的HbA2水平但MCV、MCH降低的