中藥復(fù)方抑瘤飲體內(nèi)影響小鼠S180腫瘤組織中巨噬細(xì)胞浸潤及TNF-α、iNOS、Bcl-2、Bax表達(dá)的動態(tài)研究.pdf

1、目的：腫瘤是威脅人類健康的重大疾??；中藥復(fù)方因具有多途徑、多靶點(diǎn)、毒副作用小等優(yōu)勢，在腫瘤治療和輔助治療方面已成為新的研究熱點(diǎn)。腫瘤組織中巨噬細(xì)胞(Macrophage，Mψ)浸潤和抗瘤相關(guān)分子及凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，與腫瘤的生長密切相關(guān)；了解中藥對之影響，是研究中藥抗腫瘤機(jī)制的重要方面。中藥復(fù)方抑瘤飲(以下簡稱“抑瘤飲”簡寫為“YLY”)是在中醫(yī)抗腫瘤理論指導(dǎo)下組成的方劑，其主要成分為：黃芪、黨參、云芝、三七、仙鶴草、墨旱蓮、雞血藤、卷

2、柏、大棗、陳皮等；臨床應(yīng)用和預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示其體內(nèi)確有抗腫瘤效果。為揭示其體內(nèi)抗腫瘤的機(jī)制，本研究以小鼠荷S180腫瘤后每日灌服抑瘤飲，于不同時間點(diǎn)取瘤制切片行免疫組化染色，動態(tài)觀察對腫瘤組織中Mψ浸潤及腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(Induciblenitricoxidesynthase，iNOS)、Bcl-2和Bax表達(dá)的影響；以明確抑瘤飲體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)是否與之有關(guān)。

3、 方法：給BALB/c小鼠右腋皮下接種濃度為1×107/mL的S180細(xì)胞，0.2mL/只。其中，抑瘤飲組于荷瘤24h后開始灌服抑瘤飲，2次/日，0.5mL/次；荷瘤對照組(以下簡稱“對照組”簡寫為“control”)同時灌服涼開水，2次/日，0.5mL/次。每日觀察小鼠和腫瘤生長情況。在灌胃10天、20天、30天、40天時殺鼠稱取體重，取瘤稱取瘤重。取腫瘤制成石蠟切片：HE染色，常規(guī)病理觀察；免疫組化法檢測腫瘤組織中Mψ的浸潤及TN

4、F-α、iNOS、Bcl-2和Bax的表達(dá)，并以圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析。圖像分析，以陽性酶點(diǎn)(Positiveenzymedot，PED)表示陽性染色范圍大小；以灰度值(Greyscale，GS)表示陽性染色強(qiáng)度，取值范圍為0～255，其數(shù)值越大表示陽性染色越弱，其數(shù)值越小表示陽性染色越強(qiáng)。 結(jié)果：1抑瘤飲對小鼠S180移植腫瘤生長的動態(tài)影響 對照組小鼠接種腫瘤細(xì)胞后，第4、5日可觸及腫瘤；5～10日腫瘤生長速度最快；10

5、日后腫瘤生長速度有所下降；20日后又漸上升。與對照組相比，抑瘤飲組小鼠腫瘤生長速度，前5天雖稍顯低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；5天后直至20天，降低即有顯著意義(P＜0.05)；20天后降低更為顯著(P＜0.01)。 抑瘤飲組于第10、20、30、40天時間點(diǎn)：抑瘤率分別為21.89％±3.49％、28.77％±5.12％、48.65％±4.53％和59.74％±5.71％；瘤指數(shù)分別為5.09±0.93、6.00±0.7

6、3、6.58±1.49和11.61±6.07。對照組瘤指數(shù)在相應(yīng)時間點(diǎn)分別為6.42±0.55、7.63±1.49、10.34±3.65和20.50±7.81，均明顯高于抑瘤飲組(P＜0.05)，且兩組差異逐漸增大。 2腫瘤組織HE染色顯微鏡觀察 自20天后，抑瘤飲組與對照組相比，間質(zhì)增多，腫瘤細(xì)胞排列稀疏，核分裂象少，壞死和凋亡多。各時間點(diǎn)抑瘤飲組腫瘤組織中淋巴細(xì)胞和Mψ浸潤均多于對照組。 3腫瘤組織免疫組化染

7、色 3.1抑瘤飲對腫瘤組織中Mψ浸潤的動態(tài)影響3.1.1Mψ-GS：10天、20天、30天、40天點(diǎn)時，抑瘤飲組(分別為159.72±15.44、162.21±14.45、165.10±11.45、162.39±14.94)與對照組(分別為157.51±12.66、168.12±11.75、165.43±7.21、166.48±17.52)相比，均無顯著差異(均P＞0.05)。動態(tài)分析：兩組組內(nèi)各時間點(diǎn)間均無顯著差異。

8、3.1.2Mψ-PED：10天、20天、30天、40天點(diǎn)時，抑瘤飲組(分別為952.23±79.52、888.03±100.24、654.40±55.09、561.09±55.42)與對照組(分別為528.60±47.96、382.31±37.83、290.34±57.14、94.37±18.68)相比，均顯著升高(均P＜0.01)。動態(tài)分析：對照組呈下降趨勢；抑瘤飲組也呈下降趨勢，但仍高于對照組。 3.2抑瘤飲對腫瘤組織中抗瘤

9、相關(guān)分子表達(dá)的動態(tài)影響 3.2.1TNF-α： 3.2.1.1TNF-α-GS：10天點(diǎn)時，抑瘤飲組(157.58±5.26)與對照組(158.30±5.77)相比，無顯著差異(P＞0.05)；20天、30天、40天點(diǎn)時，抑瘤飲組(分別為147.19±7.80、161.56±5.63、162.32±5.67)與對照組(分別為167.89±6.85、176.37±9.08、175.97±5.88)相比，均顯著降低(均P＜0

10、.01)。動態(tài)分析：對照組呈逐漸上升趨勢；抑瘤飲組10天、30天、40天點(diǎn)間無顯著差異，而20天點(diǎn)時低。 3.2.1.2TNF-α-PED：10天點(diǎn)時，抑瘤飲組(1304.60±120.83)與對照組(1193.94±145.99)相比，無顯著差異(P＞0.05)；20天、30天、40天點(diǎn)時，抑瘤飲組(分別為1130.49±132.71、972.51±109.52、836.74±91.57)與對照組(分別為403.60±66.7

11、6、126.03±25.03、79.26±15.44)相比，均顯著升高(均P＜0.01)。動態(tài)分析：對照組呈下降趨勢；抑瘤飲組也呈下降趨勢，但仍高于對照組。 3.2.2iNOS：3.2.2.1iNOS-GS：10天點(diǎn)時，抑瘤飲組(163.66±8.14)與對照組(160.33±7.16)相比，無顯著差異(P＞0.05)；20天、30天點(diǎn)時，抑瘤飲組(分別為150.58±8.42、150.94±4.52)與對照組(分別為159.3

12、4±5.86、161.94±12.31)相比，均顯著降低(均P＜0.05)；40天點(diǎn)時，抑瘤飲組(150.12±4.00)與對照組(163.57±5.95)相比，降低極顯著(P＜0.01)。動態(tài)分析：對照組各時間點(diǎn)間無顯著差異；抑瘤飲組20天、30天、40天點(diǎn)間無顯著差異，但均低于10天點(diǎn)。 3.2.2.2iNOS-PED：10天點(diǎn)時，抑瘤飲組(287.00±75.25)與對照組(245.77±72.62)相比，無顯著差異(P＞

13、0.05)；20天30天、40天點(diǎn)時，抑瘤飲組(分別為762.57±136.13、1024.83±227.79、1121.43±164.85)與對照組(分別為439.23±85.55、377.29±86.55、346.41±46.11)相比，均顯著升高(均P＜0.01)。動態(tài)分析：對照組在20天點(diǎn)達(dá)到最大值后開始下降；抑瘤飲組呈升高趨勢。 3.3抑瘤飲對腫瘤組織中凋亡相關(guān)基因表達(dá)的動態(tài)影響 3.3.1Bcl-2：

14、 3.3.1.1Bcl-2-GS：10天、20天、30天、40天點(diǎn)時，抑瘤飲組(分別為160.27±18.57、157.75±14.70、159.04±10.57、156.76±18.72)與對照組(分別為154.94±9.82、155.93±7.85、158.83±8.84、158.76±10.49)相比，均無顯著差異(均P＞0.05)。動態(tài)分析：兩組組內(nèi)均無顯著差異。 3.3.1.2Bcl-2-PED：10天、20天、30天

15、、40天點(diǎn)時，抑瘤飲組(分別為1911.26±301.38、1917.49±201.81、1749.11±308.47、1228.89±173.33)與對照組(分別為2509.77±254.65、2503.57±210.06、2395.40±273.34、2368.86±267.86)相比，均顯著降低(均P＜0.01)。動態(tài)分析：對照組各時間點(diǎn)間無顯著差異；抑瘤飲組呈下降趨勢。 3.3.2Bax： 3.3.2.1Bax-

16、GS：10天點(diǎn)時，抑瘤飲組(173.31±8.29)與對照組(177.22±11.68)相比，無顯著差異(P＞0.05)；20天點(diǎn)時，抑瘤飲組(157.35±8.88)與對照組(179.76±19.70)相比，顯著降低(P＜0.05)；30天、40天點(diǎn)時，抑瘤飲組(分別為141.78±17.58、151.59±15.24)與對照組(分別為170.69±16.01、181.93±13.52)相比，降低極顯著(均P＜0.01)。動態(tài)分析：對

17、照組各時間點(diǎn)間無顯著差異；抑瘤飲組呈下降趨勢。 3.3.2.2Bax-PED：10天、20天、30天、40天點(diǎn)時，抑瘤飲組(分別為1105.17±189.54、1229.74±156.55、1349.17±228.04、1583.17±241.94)與對照組(分別為229.23±37.81、273.34±41.83、267.03±35.40、255.74±28.28)相比，均顯著升高(均P＜0.01)。動態(tài)分析：對照組各時間點(diǎn)間